HBV蛋白相关免疫应答致HBV转基因小鼠肝组织病理损伤的研究.pdf

郑州大学
博士学位论文
HBV蛋白相关免疫应答致HBV转基因小鼠肝组织病理损伤的研究
姓名:刘红
申请学位级别:博士
专业:病理学
指导教师:张钦宪

病理掇伤的研究靼紫喙孛庖哂Υ鹬翲转基因小鼠肝组织摘要对己型肝炎发病枫制的研究一直爨蓟人们琛耗ⅰ4狼叭媳兀倚透窝博士研究生;麓红姆师:张钦宪郑州大学基础医学院郑蚝乙型翳炎薅毒琀现卣岛死啾<保腥救刻迦可发生急性肝炎、慢性肝炎、肝硬化和肝癌。全球约荫亿慢性感染者,豫洲属手离流行区,戮嚣产期传播麓圭,终有~静慢性腥敬澜ɑ岱⑸进展性肝病钟不透伟。患者肝脏等脏器的痰骥改变烹娶是由病毒各熬因编码的蛋自与宿主闽的免疫反应造成的,但鼹其具体病理损伤机制还不甚清楚。在髌僖虮嗦氲牡鞍字校淼白詜秘核心蛋囊均具鸯较强的免疫覆瞧,缝诱导枫钵产生较强豹髂液靼细胞免疫应答;而且绣鞍缀秃诵牡鞍紫喙氐拿庖哂Υ鸪煞帜芤裨斐筛卧病理损伤还不溥楚。为了瓣乙爨翳炎懿发瘾橇穰,茏葵是盟湮∪构乇C疫应答成分在己型肝炎发病中的作用,,采鬻疫和过继转移的实验方法进行了乙型肝炎发病机制方蕊的研究。而且,目前对人肝细胞核内核心蛋白的功能还不了解,国内也没有乙肝病毒核心蛋白蒸因转基因小鼠,为进一步探讨乙翳瘸毒核心蛋融在己型疯毒性黔炎发痪机制中熬作月,鬟建立一个合适的动物模型。本实验分两部分。第一蘸分械蚌尉瞎孛庖咂4鹬乱冶钚闶盅鬃;涡∠±戆慈凭擦掰邑建立虢含琒基因豹转薹蔽小氯/痑与正常阎品系小鼠交醮,获得蛔哟∈螅璓和肝脏活检组织免疫组织亿学筛选,得到二者均阳性的转基爵小鼠只。用含甋基因的质究博宦坌郑州人学中义摘嫂
度逢出瑗炎钕入惫性乙登释炎静瘸瑾改交,表瑗必嚣鲴瓣广泛静意毛球榉交,盘襄缀丈较致敏戆巽缀魏缢聪怪痍理交纯壅瑗浚、程度鞍嗣期梵轻。经粒..止乔凹〖∪庾⑸涿庖哒痗小鼠,获得抗血滴和致敏黪缨瑟。将蒎盘潼、致敏薅纲瑰芙∈缶亚致延裁量照射,以下篾称照射⒖寡G致敏脾细胞丈、致敏脾细臌芴逍∈笪醋豫致死剂蘩爨射,苏下篾称来照旒、;蛐∈筇迥凇I柰逊亲;蛐∈笪6哉铡T诓煌奔、经黻眶球霸静脉采盎,检溯受俸小鬣矗涛挠固濉⑶皊乖⒖骨皊固濉⒆0泵浮⒛蛩氐:图◆谋浠2⑼时颈椎脱臼处死小鼠,取肝、脾、肾、麟、肺和肌肉组躐常规石蜡包埋、切片、瓻染色鹈庖叨兄Ъ觳猓炔旄髌鞴佟⒆橹宀±砀谋浜虷的表达庖呒男в盏检嗝庖咂ご鹄冢庖哽嘣媸篝惹谱铡㈧懊赭傩瓜清旅羝⑾赴直鸸套R频阶;蛐∈筇迥诤螅;蛐∈蟾卧嗑煌内皮细胞肿胀,赴錾愎芮透涡∫赌诟蜗赴幕邓腊椴煌潭的单个棱细胞的没漓。抗斑清组冤致敏辟细胞的输入,单个核缎施盼浸涌出现最晕,程度最重,说明肝小时内浸润的单个核细胞是受体小鼠来源的,是非特异性的,非特异性的免疫应答参与了转基因小鼠肝组织的免疫病理损伤。抗矗瀵旅赭跤照射⒅旅舻霓队щ照射⒅旅艄^断赴来照射三组肝组织的病骤变化较抗血清组出现晚,程度较同期为轻,而胆致敏的脾细胞照射的转基因小鼠第脾脏萎缩,第⒃嘣錾迪驴杉馨拖赴錾多核匿细魏。薜腕的增生与肝小补内单个核细稔漫满崮现的对闻楚一致鹃。这些结果进一步的说明肝内浸润的单个核细胞是受体小鼠来源的,可能来源乎脾脏,怒非抗原特异性的,非特异性免疫应答参与了乙毅肝炎的免疫病理损伤。而过继转移正常小鼠的膊纲魏没有弓鹗芴逍∑鱿掷鄘娃入急性乙型翳炎的改变,提示特异性免疫应答谯乙型肝炎免疫病理损伤中的关键性作用。抗赢清旅羝⑾赴蒸秘菝盘渗组霉黢蠢少量革令孩缎蕤瓣授滤。耱、小殛蠢腿疼组织等塑织秃明显的病理改变。对照组小鼠朱出现类似人急性乙型肝炎的病理改变,仪有肝缩麓酶轻微瓣酝。┞垂惴撼情况。点、中文摘篮郊卅搜博Q宦畚
变,转基因小鼠对转入基因产物是免痰耐受的。这些结果表明,目的基因不但可疫斑答参与乙缴翳炎瓣免疫痪壤装臻。翳走浸滤戆萃令捩缨憝怒抗盘潘孛蕊髂终肿,但凭肝小叶内和汇管区的单个核细胞浸润,两种抗体引起的病理改变无明驻差别。嚣撬盘瀵组除鸯翳细瑰的广泛本瓣外,述有野,⑹蹦诘ジ龊⑾鸽螅示单个核细胞浸润是由抗血清中抗体外的成分引起的。抗血滴组或/,肝细胞在乙肝病毒的清除中起着重骚作用。乙型繇炎病毒核心蛋鑫基因转麓霞,Ⅶ嗟牟应用受糖卵原核照微注射技术,将线性化的含有榱心蛋自蒺因亚型的真核寝达质靛.⑸淙隒/∈笫芫研坌栽酥校缓笾入只假孕母鼠。共没射鍪懿诼眩蛔惺螅却婊睢3樘嶙惺尾组织琍筛选到籉小鼠,转基因整和率为%,与逶零グ菊崧拭滚セ帷J瞬Ы阂勺橹懊庖哏林垦Ъ觳猓小鼠为阳性,阳性率为ァ=ǜ肍鼠与正常同系小鼠交配,褥囊哭代奎鼠,遐缰缓簇霾篷觳饴葱隳会幔檫%。只粜缘腇∈笾猩只肝组织免疫组织化学检