5种方法对蝴蝶干标本DNA的提取效果研究.pdf

安徽农业科学。..,:—责任编辑郑丹丹责任校对傅真治
种方法对蝴蝶干标本的提取效果研究
乔枫,陈振宁,耿贵工,李思未
.青海师范大学,青藏高原环境与资源教育部重点实验室,青海西宁;.青海农林科学院作物育种栽培研究所,青海西宁
摘要『目的研究蝴蝶干标本的提取方法。方法采用种不同的方法法、一巯基乙醇一酚法、法、饱和
法、一巯基乙醇一氯仿法对蝴蝶干标本进行提取。结果一巯基乙醇一酚法、饱和法和一巯基乙醇一氯仿法适
合蝴蝶干标本基因组的提取,并且能成功地应用于蝴蝶线粒体基因、和核基因一的扩增。结论一巯基乙
醇一酚法、饱和法和一巯基乙醇一氯仿法可以用于研究蝴蝶干标本的抽提,为蝴蝶的分子系统进化研究奠定了基础。
关键词蝴蝶;干标本;提取
中图分类号文献标识码文章编号——一

—,,—
.
『】.『.
,—, ,,——
.——,—
—】..
,一.——
..——
..
::
自然界的蝴蝶五彩缤纷,色彩艳丽多样。但是,不同类引物由北京三博远志生物有限公司合成。
型的蝴蝶,它们的斑纹具有种的特异性。人们经常将采集.. 设备。扩增仪—、电泳仪、台
到的蝴蝶制作成干标本,既便于保存,又利于形态学直接比式高速冷冻离心机—、恒温水浴锅、微波炉、移液器
较与鉴定。传统的蝴蝶分类仅是从形态学上进行,但是对、紫外凝胶成像系统—。
于一些珍稀种类或变种从形态学上鉴定不够科学,有待于. 基因组提取
从分子水平上分析来进行鉴定分类。近年来,随着分子.. 法方法①。取蝴蝶的足及消化液
生物学和其试验技术的发展,人们能够从蝴蝶干标本基因—,/,/,
组分子水平来探究各蝴蝶类群之间的亲缘和进化关.,高压灭菌于,的离心管中,用玻璃棒小杵研磨;
系。其中蝴蝶干标本基因组的有效提取成为蝴蝶分再加消化液冲洗玻璃棒,加入至终浓度为% 、
子系统研究的核心,样品基因组的质量好坏将直接影蛋白酶至终浓度为/;混匀后,℃水浴过夜,期
响到试验的成败。所以,从蝴蝶干标本中提取出有效间轻摇数次。酚、氯仿分别抽提次,加一℃预冷的倍
的方法是分子系统进化研究的重要前提。笔者在前人研究体积的无水乙醇,于一℃沉淀过夜,./离心
的基础上,采用种不同方法对蝴蝶干标本的基因组,弃上清。%乙醇洗涤次,自然干燥后,加入灭
提取方法进行比较,结合蝴蝶细胞色素氧化酶基因, 菌/—,/,.溶解,
是线粒体蛋白质编码基因、一.,是一℃冰箱保存备用。
核基因和细胞色素基因,是线粒体蛋白质编码基..一巯基乙醇一酚法方法②。取蝴蝶的足,用双
因序列的扩增的研究,提出了适合蝴蝶干标本蒸水浸泡。剪碎材料,加消化液/
的提取方法。—,/,/,.,未灭
,用玻璃棒研磨;再加消
. 材料化液冲洗玻璃棒,加入至终浓度为% 、蛋白酶至终
.. 标本与引物。供试蝴蝶干标本为青海师范大学动物浓度为/、一巯基乙醇至终浓度为% /;混匀
学实验室保存,种类包括小檗绢粉蝶—后,℃水浴过夜,期间轻摇数次。加等体积的饱和酚,慢摇
,鳞翅目,粉蝶科和柑橘凤蝶,/离心,抽提次。加等体积一
.,鳞翅目,凤蝶科,年采于青海互℃预冷的异丙醇,于一加℃沉淀过夜,/离心
助。每次提取