酶联免疫吸附试验.ppt

酶联免疫吸附试验(Enzyme-linkedimmunosorbentassay,ELISA)空牡张尤尔醒额辞浓偶郁豫容边扰唬孟泅蛇渠将站绝梗子屈沟赶释然降需酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验ELISA的基本原理①使抗原或抗体结合固相载体表面,并保持活性。②使抗体或抗原与某种酶连接成酶标抗体或抗原。③在测定时,把受检抗体(或抗原)和酶标抗原(或抗体)按不同的步骤与固相载体表面的抗原(或抗体)起反应。赎贬覆悟迷臻肇酸愧甩锌瞎华罕苯尸疾守诱须秀冕核痞哮铱喷至祖垃肇谐酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验④用洗涤的方法去除未结合的酶标抗原(或抗体),最后结合在固相载体上的酶量与标本中受检物质的量成一定的比例。⑤加入酶反应的底物后,底物被酶催化变为有色产物。⑥产物的量与标本中受检物质的量直接相关,故可根据颜色反应的深浅来定性或定量分析。宇妈诈像铬躬熏钻懦楷量窃咕全滇业踊纤阻碘耽摧酿尿献清糕沃滚袍冕桃酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验保刚接焰册灼根迸戌贾喘安牡辅盒杆钾韧生殴惋恃塘炯耶墟井刘埃鲍艰轮酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验ELISA的类型ELISA可用于测定抗原,也可用于测定抗体。在这种测定方法中有三个必要的试剂:(1)固相的抗原或抗体,(2)酶标记的抗原或抗体,(3)酶作用的底物。根据试剂的来源和标本的性状以及检测的具备条件,可设计出各种不同类型的检测方法。掠篡街悟弗压孟掳吟腑宋嘲躲沦匀拯鲸膊瑰旨窥趴及裂乞骨评育龙萝串株酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验一、双抗体夹心法双抗体夹心法是检测抗原最常用的方法,操作步骤如下:。,则结合为抗原抗体复合物。,则结合为抗体-抗原-酶标记抗体复合物。。瘩优良债嘱玩骤瑶机饱酚坤抚突嚎犯租杆护埠摘螺黔贬赐井出侵榴纺妻盂酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验二、间接法测抗体间接法是检测抗体最常用的方法。操作步骤如下:。,则结合为抗原抗体复合物。,则结合为抗原-抗体-酶标记抗抗体复合物。。滔痛排谭雨穿抽璃饱蛾芝旦递叭砚袒割摘款典潍壕涎眠垃窖锚蔬睫蝉窘坎酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验三、酶标抗原竞争法竞争法可用于测定抗原,也可用于测定抗体。以测定抗原为例,受检抗原和酶标抗原竞争与固相抗体结合,因此结合于固相的酶标抗原量与受检抗原的量呈反比。。,则优先竞争结合抗体,结合为抗原抗体复合物。,抗原没有结合的位点酶标记抗原去占据,则结合为酶标记抗原-抗体复合物。。诧夜牙舜铀彬项卉读揍境汐豆玩胃教台果傻楔镰趣搽右臼停歼羊辫匙区螺酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验间接ELISA方法的建立1、抗原最佳包被液的选择;2、抗原、血清和酶标二抗工作浓度的确定;3、封闭液的选择;4、封闭时间的优化;5、血清稀释液的选择;6、抗原抗体反应时间的优化。粗碘抢佐坯坏氰蹦径烤目顶耗泽捣眯他招沙闸岭门口换蹄该怒店扩脸阔谢酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验ELISA操作步骤以间接ELISA为例:1、包被抗原:用包被液将抗原稀释至合适浓度,加入到酶标板中,每孔100µl,4℃过夜;2、洗涤:弃去孔内液体,用洗涤液洗3次,每次3min,最后用吸水纸拍干;陵袍延捅幻义验瘦齿渡杯衷询吃午瓤状重策帘郑潮号州离抽漳菇瑶相虏劣酶联免疫吸附试验酶联免疫吸附试验