重组抗HER2人源化单克隆抗体纯化工艺研究.doc

重组抗HER2人源化单克隆抗体纯化工艺研究[摘要]目的:开发重组抗HER2人源化单克隆抗体纯化工艺。方法:选择了亲和层析介质、阳离子层析介质、疏水层析介质作为备选介质进行纯化工艺开发。结果:确定纯化策略为依次Sure、SP-FF、Phenyl-HP层析。[关键词]重组抗HER2人源化单克隆抗体层析工艺中图分类号:TQ2文献标识码:A文章编号:1009-914X()22-0296-01 重组抗HER2人源化单克隆抗体(rhAnti-HER2)由人的IgGl框架区及能与HER2结合的鼠抗HER2抗体的互补决定区构成[1]。rhAnti-HER2在体外及动物实验中均显示可抑制HER2过度表示的肿瘤细胞的增殖。我们对rhAnti-HER2纯化工艺进行了研究。 AKTA纯化系统、SORVALL离心机、亲和层析介质Sure、阳离子层析介质SP-FF、疏水层析介质Phenyl-HP rhAnti-HER2细胞培养丰收液(本研究所自产)、Tris(SIGMA)、HCl(西陇化工股份有限公司)、NaCl(天津博迪化工股份有限公司)、硫酸铵(天津市化学试剂三厂) -HER2抗体的Fc段在中性溶液中能够和ProteinA特异结合,而丰收液中绝大部分杂质由于不能结合ProteinA而被去除,因此选择Sure作为第一步层析介质,能够在最大效率捕获目的蛋白的同时达到很好的纯化效果。 ,上样量保持一致,、、、,根据收率及纯度结果确定洗脱pH值。结果洗脱量分别为18、18、17、16mg;A280/、、、;%、%、%、%。-,A280/A260比值逐渐增加,蛋白纯度无明显差异,-。 ,、、、,上样量恒定,保留时间5min,,考察收率及纯度确定上样液的pH值。%、%、%、%;%、%、%、%。结果显示,,,-。 ,分离效果好,效率高。我们选用SP-FF阳离子交换层析凝胶进行后续纯化,此步骤可进一步去除残留杂质。 ,。保留时间分别为1、2、5min,其它条件不变,确定动态载量并根据动态载量来确定上样保留时间。%、%、%;动态载量分别为31、52、79mg/ml。结果显示,各保留时间下,回收率均大于85%,,动态载量随保留时间增加而增加,最后趋于平稳,因此选择保留时间大于5min,此时动态载量为79mg/ml。 、、,进行SP层析,保留时间5min,0