实验三血清红细胞制备.ppt

实验三、实验动物的采血方法、动物血清及红细胞的制备方法指导老师:程燕实验目的1、学习实验动物不同部位的取无菌采血方法;2、学习动物血清、红细胞的制备;3、观察兔、豚鼠的免疫器官。实验原理?免疫系统由免疫器官、免疫组织、免疫细胞和免疫分子组成。?免疫细胞 :吞噬细胞、淋巴器官、树突状细胞、NK细胞、NKT细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞; :T细胞、B细胞?免疫分子 :TCR、BCR、CD分子、粘附分子、MHC分子、细胞因子受体。 :免疫球蛋白、补体、细胞因子。实验原理?血液是一种结缔组织(细胞间质)。血液系统是各种重要的免疫细胞、免疫分子的载体,也是各种免疫事件发生的场所。?组成:1、血浆①血浆蛋白(白蛋白、球蛋白、纤维蛋白原)?②脂蛋白、无机盐、氧等成分?③激素、酶、抗体?④细胞代谢产物等。? 2、血细胞①红血球、②白血球(有粒白细胞:中性粒细胞、嗜酸性粒细胞和嗜碱性粒细胞和无粒白细胞:单核细胞和淋巴细胞)③血小板实验原理?实验研究中,要采集实验动物的血液进行检查或分析,故必须掌握血液的正确采集、分离和保存的操作技术。?采血方法的选择,主要决定于实验的目的所需血量以及动物种类。①用血量较少可刺破组织取毛细血管的血②当需血量较多时可作静脉采血(原则:静脉采血时,若需反复多次,应自远离心脏端开始,以免发生栓塞而影响整条静脉)实验原理?现将采用血方法按动物和部位分别加以介绍。?小鼠和大鼠采血方法:割尾采血法、尾静脉穿刺采血、眼眶后静脉丛采血、摘眼球法、断头采血、颈(股)动静脉采血?豚鼠采血法:耳缘剪口采血、心脏采血、股动脉采血、背中足静脉取血?兔采血法:耳静脉采血、耳中央动脉采血、心脏取血、后肢胫部皮下静脉取血、股动静脉、颈动静脉取血、?鸡采血法:翼根静脉采血、心脏采血、颈静脉采血实验原理家兔采血方法(1)耳缘静脉采血:家兔固定,将耳缘静脉皮肤上的毛拔去或剪去,75%酒精消毒,用左手食指和中指夹住静脉近心端,以使其血管怒张拇指和小指夹住耳缘部分,以左手无名指和小指放在耳下作垫,待静脉充盈后,右手持注射器使针头由静脉末端刺入,顺血管方向向心端刺约1-,放松左手拇指和食指对血管的压迫,右手缓慢抽吸注射器,若注射阻力较大,说明针头没有刺入静脉,应调整针头或重新穿刺;也可以刀片在血管上切一小口,让血自然流出,滴入盛器内,采血完毕,用干棉球按压止血。(2)兔心脏穿刺取血:家兔背位固定,在左胸第2~4肋间剪毛一块,用75%酒精和碘伏消毒。然后用5~10ml注射器,在胸骨左缘3-4肋间心尖搏动最明显处作垂直穿刺。?注意事项有:⑴动作宜迅速,以缩短在心脏内的留针时间和防止血液凝固;⑵如针头已进入心脏但抽不出血时,应将针头稍微后退一点。⑶在胸腔内针头不应左右摆动以防止伤及心,肺、实验原理豚鼠采血方法(1)背中足静脉取血固定动物,将动物脚背面用酒精消毒,找出背中足静脉后,以左手的拇指和食指拉住豚鼠的趾端,右手拿的注射针刺入静脉。采血后,用纱布或脱脂棉压迫止血。反复采血时,两后肢交替使用。(2)心脏采血通常在胸骨左缘的正中,选心跳最强的部位作穿刺。针头宜稍细长些,以免发生手术后穿刺孔出血,其操作手法详见兔心脏采血。实验动物的采血量动物种类最大安全采血量(ml)最大致死采血量(ml)