污水微生物指标检查法.doc

邯郸矿业集团总医院污水排放微生物指标检测方法 1 污水总大肠菌群的检验方法一、采样方法用采水器或其他灭菌容器采取污水样 1000 毫升, 放入灭菌瓶内, 如果是经加氯处理的污水, 需加 % 硫代硫酸钠 5 毫升中和余氯。二、检验方法总大肠菌群系指一群需氧及兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌在 37℃恒温箱内,培养 24 小时,能使乳糖发酵产酸产气。总大肠菌群数系指每升污水中,所含的总大肠菌群的数目。(一) 初发酵试验: 以无菌操作将各盛有 3 倍浓缩乳糖蛋白胨培养液 5 毫升的 5 支发酵管内, 各接种污水样 10 毫升, 将各盛有单料乳糖蛋白胨培养液约 10 毫升 5 支的发酵管内, 各接种污水样 1 毫升, 再将各盛有单料乳糖蛋白脏培养液约 10 毫升的 5 支发酵管内,各接种 1∶ 10 稀释的污水样 1 毫升(相当于原污水样 毫升) 。将此 15 支管已接种的发酵管置于 37℃恒温箱内,培养 24 小时。(二)平板分离:经培养 24 小时后,将产酸产气及只产酸不产气的发酵管,分别接种于伊红美兰培养基或品红亚硫酸钠培养基上,置 37℃恒温箱培养 18~ 24 小时,挑选符合下列特征的菌落,取菌落的一小部分,进行涂片、革兰氏染色、镜检。 1 伊红美兰培养基上的菌落色泽: (1 )深紫黑色,具有金属光泽的菌落; (2 )紫黑色,不带或略带金属光泽的菌落; (3 )淡紫红色、中心色较深的菌落。 2 品红亚硫酸钠培养基上的菌落色泽: (1 )紫红色,具有金属光泽的菌落; (2 )深红色,不带或略带金属光泽的菌落; (3 )淡红色,中心色较深的菌落。(三)复发酵试验:涂片、镜检的菌落,如为革兰氏阴性无芽孢杆菌,则挑取上述典型菌落 1~3个接种于一支单料乳糖发酵管内,然后置于 37℃恒温箱内,培养 24 小时,产酸产气者(包括小量产气)即证实有大肠菌群存在。根据证实有大肠菌群存在的阳性管数,查对总大肠菌群近似数( MpN )检索表(附表 )即是每升污水中的大肠菌群数。此 MPN 表中所列数值系指 100 毫升水样中的细菌数, 因此需将表中的数值再乘 10、为每 1000 毫升水中的细菌数。举例:某一污水样接种 10 毫升的 5 支管中有 5 管为阳性;接种 1 毫升的 5 支管中有 2 管为阳性;接种 1∶ 10 稀释水样 1 毫升(即原污水样 毫升)的 5 支管皆为阴性,即结果为 5、2、0, 查附表 得知 100 毫升污水中总大肠菌群数为 49个,即 1000 毫升污水中总大肠菌群数为 49× 10 = 490 个。邯郸矿业集团总医院污水排放微生物指标检测方法 2 总大肠菌群近似数( MPN )检索表附表接种量(毫升)每100毫升水样中总大肠菌群近似数接种量(毫升)每100毫升水样中总大肠菌群近似数 000000 000000 012345 024579 000000 444444 012345 8911131517 000000 111111 012345 2467911 000000 555555 012345 91113151719 000000 222222 012345 46791113 111111 000000 012345 24681012 000000 333333 012