桂德霉素抗肿瘤活性的研究.pdf

中国协和医科大学博士学位论文中文摘要桂德霉素抗肿瘤活性研究中文摘要格尔德霉素((艳lda眦yCin GA)是从链霉菌培养液中分离得到的第一个苯醌安莎类抗生素,研究表明GA具有多方面的生物活性。现已证实GA通过特异性的与热休克蛋白90(Hsp90)结合,抑制其分子伴侣功能并导致被陪伴分子的去稳定和降解。由于GA的作用,参与细胞增殖和生存的许多信号传递蛋白(例如跨膜酪氨酸激酶、 受体、信号转导蛋白、癌基因和抑癌基因蛋白、嵌合信号蛋白、甾体激素受体(雄激素雌激素孕酮受体)、细胞周期调节因子)的稳定性或功能都因Hsp90的功能被抑制而受到影响。另外,肿瘤细胞在恶性增殖的过程中经常处于应激状态,肿瘤细胞Hsp90组成型表达要与正常细胞相比高出2 —10倍。因此目前针对Hsp90抑制剂GA的药物开发已受到广泛关注。肉桂酸(Cin玎amicA疋id,CA)是一种广泛存在的天然产物,由于在限定范围内无毒性,美国将其列入GRAS(一般公认为是安全的)范围。故肉桂酸是一类来源广泛和安全的物质。有报道表明它具有广泛的抗实体瘤活性,包括黑色素癌、前列腺癌、肺癌、胶质细胞瘤、肝癌和白血病等。它对肿瘤细胞具有抑制其生长增殖和诱导其分化的作用,而且其衍生物肉桂酰胺类化合物亦具有抗肿瘤括性。本研究课题通过化学方法将肉桂酸引入到GA的l 7位得到GA的肉桂酸衍生物,定名为桂德霉素(伽deInyciIl GI肌),并对GIM的体外、体内抗肿瘤活性进行了初步研究。中国协和医科大学博士学位论文中文摘要一、GUM作用于肿瘤细胞的体外实验研究 ,人胰腺癌SWl990细胞, 人肝癌HepG2细胞,人肺癌H460细胞,人大肠癌HCTll6细胞,人骨髓瘤U266细胞的增殖抑制作用。不同浓度的GIM作用细胞48 h后,利用MTT法检测GUM对各种肿瘤细胞的增殖抑制作用。MTT结果显示,GIM对肿瘤细胞抑制作用的IC50 值分别为MCF-7(),SWl990(),HepG2 (“∥“),( pg/血),HCTll6( p幽m),U266()。 33258荧光染色法和AnnexiIl 。不同浓度GLnⅥ作用细胞24 h和48 h后,细胞凋亡比率逐渐增高, 呈浓度依赖性和时间依赖性。其中10}L幽[m,l删, 给药24 h后诱导细胞凋亡的比率分别为:,% ±%、%±%、%±%、%±%(Con舡D1); 人胰腺癌SWl990细胞,%±%、%±%、%± %、%±%(Con心01);人肝癌HepG2细胞,%±%、 %±%、%±%、%±%(Con仃01);人肺癌H460细胞,%±%、%±%、%±%、%±% (Con仃D1);人骨髓瘤U266细胞,%±%、%±%、 %±%、%±%(Con们1)。三个剂量GIM给药48 h后诱导细胞凋亡的比率分别为:,%±%、 %±%、%±%、%±%(Con仃01);人胰腺癌SWl990 细胞,%±%、%±%、%±%、%± %(Con们1);人肝癌HepG2细胞,%±%、%±%、 %±%、%±%(Con仃01);人肺癌H460细胞,%± %、%±%、%±%、%±%(Con缸D1);人骨髓瘤U266细胞,%±%、%±%、%±%、 %±%(Con臼-01)。aM高剂量组和中剂量组的肿瘤凋亡率显著 2 中国协和医科大学博士学位论文中文摘要高于对照组(尸<,P<)。荧光显微镜下可见lO删和l p咖1 的GIM作用后细胞出现染色质凝集、细胞核固缩、核碎裂、形成凋亡小体等典型的凋亡细胞形态学改变。 、人肝癌HepG2 细胞、人肺癌H460细胞、人