革兰氏染色.doc

细菌革兰氏染色-改良 BROWN AND BRENN 目的: 用于鉴别组织的革兰氏阳性和革兰氏阴性菌。原理:革兰氏阳性和革兰氏阴性菌两者的细胞壁都由肽聚糖构成(革兰氏阳性菌壁较厚),两者均着染结晶紫。革兰氏阴性菌的肽聚糖壁外有一层脂多糖。用丙酮稍洗, 可使结晶紫被分化出来。而革兰氏阴性菌可着染碱性品红。对照: 被感染的阑尾,或含有革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的组织。固定: 10% 甲醛技术: 4-5 microns 石蜡切片设备: 染色架,染色缸,滴瓶,吸水纸。蒸馏水清洗玻璃器皿。试剂: 1% 结晶紫: 结晶紫 Crystal violet gm 蒸馏水 Distilled water ml 混合溶解,过滤后放入滴瓶。保存期 1年。警告:刺激性,可能致癌。 Lugol's 碘液详见备用液。警告:皮肤致敏,对眼睛、皮肤和呼吸系统有刺激性。丙酮: 购买警告:易燃性。 % 碱性品红: 碱性品红 Basic fuchsin gm 蒸馏水 Distilled water ml 混合溶解,过滤后放入滴瓶。保存期 6个月。警告:可能致癌。苦味酸- 丙酮: 苦味酸饱和液 Picric acid, saturated ml 丙酮 Acetone ml 用后丢弃。警告:刺激性,可能致癌。安全: 穿戴手套、护目镜、微过滤口罩和白大衣。避免接触和吸入染料和化学品。结晶紫/龙胆紫:致癌物质,皮肤刺激。碘酒:皮肤致敏,对眼睛、皮肤和呼吸系统有刺激性,腐蚀性。碱性品红:致癌物质,在通风橱中使用。苦味酸:干燥可能引起爆炸,侵入途径为皮肤接触。丙酮:摄入有中度毒性,吸入可能引起头昏眼花、头痛和对呼吸系统有刺激性。皮肤接触可致脱脂和皮炎。程序: 。 ,在组织上滴上结晶紫 1 minute 。 。 4. Lugol's 碘液 1 minut 。 。 ,用丙酮快速冲洗直至无溶出。 。 ,在组织上滴上碱性品红 3 minute 。 ,吸去水份,不要完全干燥。 10. 丙酮快速 2 dips. 11. 直接浸入苦味酸-丙酮混合液,至直“鲜肉色”。 12. 丙酮快速 2次。 13. 风干,滴上二甲苯,封固。结果: 革兰氏阳性菌:蓝色革兰氏阴性菌:红色核:红色背景:黄色参考文献 Luna L, Manual of Histologic Staining Methods of the AFIP, 3rd Ed, pp 222, McGraw-Hill,NY Carsen F, Histotechnology: A Self-Instructional Text, 1990,pp194- 196,ASCP,Ill Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology Laboratory, 2nd ED, 1991, Anatech 程序卡细菌革兰氏染色-改良 BROWN AND BRENN 对照: 被感染的阑尾,或含有革兰氏阳性和革兰氏阴性菌的组织。程序: 。 ,在组织上滴上结晶紫 1 minute 。 3.