多药耐药基因MDR1 mRNA核酸扩增.pdf

多药耐药基因 MDR1 mRNA 核酸扩增(RT-PCR)
荧光检测试剂盒使用说明书
MDR1 mRNA RT-PCR Detection Kit
前言
多药耐药基因 MDR1 的表达产物 P 糖蛋白是一种 ATP 依赖型膜转运蛋白,它可以将药物及许多
其他相关分子从细胞内排出,参与许多正常的生理活动。MDR1 基因在许多肿瘤细胞中均呈高表达,
是导致肿瘤细胞对药物产生耐受的重要因素之一。
本试剂盒采用实时荧光定量 RT-PCR 技术,可以精确检测微量肿瘤组织、外周血及其他组织
和体液中细胞的 MDR1 表达,能够对肿瘤的治疗方案的确定、治疗效果的评价和预后提供帮助,
并与其他与 MDR1 表达相关的科研工作提供有力的工具。

检测标本
外周血、骨髓、组织等

检测目标
胃癌、肝癌、肠癌、肺癌、脑胶质瘤、卵巢癌、白血病等各种肿瘤细胞的多药耐药性

试剂盒规格及组成
试剂盒规格 20 次/盒。
试剂盒组成
Trizol
75%酒精 5ml
RT 反应液 450µl
m-MLV 逆转录酶 25µl
RNasin 25µl
MDR1 PCR 反应液 1505µl
Taq 酶 70µl
DEPC-H2O 500µl
阴性对照 20µl
1
热线电话:021-5446 0832 8009881995 E-mail:******@.cn 网址:
阳性对照 20µl
标准品
2支
(109copy/ml)
稀释液 500μl/支

自备试剂、材料
Eppendorf 管、 ml Eppendorf 管, 10μl 、200μl 、1000μl 吸头(进口,无菌)、氯仿、
异丙醇。(注意:所用的实验器材都要 DEPC 处理,做到无 RNA 酶污染)
建议: 鉴于荧光 PCR 反应的灵敏度要求,请使用本公司推荐的相应耗材。

标本的采集、处理和保存
本试剂盒上适用于外周血有核细胞检测。
静脉血 5ml(肝素抗凝)*,用淋巴细胞分离液分离有核细胞,将有核细胞收集到 管中(进
口,无菌),1,5000rpm离心 5min,弃上清,在沉淀中加入Trizol 500μl(请参照Trizol的使用说明书)
混匀置室温 10 分钟,加入氯仿 100μl混匀,4 0C 10000rpm 10 分钟,吸取上层水相于 ,并
加入 3 倍体积的异丙醇(预冷)混匀,置冰上 20 分钟,离心 15000rpm 15 分钟(沉淀RNA)。弃上清液,用
75%酒精 200μl漂洗一次,快速离心吸干液体(注意保留沉淀的RNA),气干后加入无菌DEPC水 20μl
溶解RNA ,按后续实验步骤操作。如隔天进行后续实验可使RNA沉淀保存在酒精中,暂存-200C。

*建议使用负压针筒抽血,取第二管血进行检测,以防止表皮细胞掺入。

检测所需仪器设备
定量 PCR 仪 PE7700、PE5700、FTC2000、低温离心机、微量移液器、恒温水浴箱。
试剂盒使用方法
∗每次检测应设立阳性和阴性对照。
∗阳性对照为酒精沉淀的R