血清成分分析摘要: 血清由许多化学成分组成,包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。本次实验,我们对血清成分进行分析,如用邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇;用盐析、浓缩分离蛋白质并用醋酸纤维素薄膜电泳鉴定;用纸层折法观察肝脏谷丙转氨酶 ALT 的转氨作用;用分光光度法测定血清丙转氨酶的活力。在掌握各种鉴定方法之外,为应用与生活提供理论与实验基础。关键词: 血清、家鸡、乌鸡、胆固醇、清蛋白、γ-球蛋白、谷丙转氨酶前言:血清,指血液凝固后, 在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。胆固醇在血液中存在于脂蛋白中,在血中存在的胆固醇绝大多数都是和脂肪酸结合的胆固醇酯,仅有 10% 不到的胆固醇是以游离态存在的。通过对血液中胆固醇含量的测定,能够判断身体健康状况,从而来调整饮食。谷丙转氨酶,主要存在于肝脏、心脏和骨骼肌中。肝细胞或某些组织损伤或坏死,都会使血液中的谷丙转氨酶升高。我们通过对血液中谷丙转氨酶的测定, 可以来判断肝功能。本次实验通过对血清总胆固醇含量测定,分离蛋白质并鉴定;观察肝脏谷丙转氨酶 ALT 的转氨作用;测定血清丙转氨酶的活力,对应用与医学生理的基础实验进行进一步的探究。并提升生化实验技能。 1 实验材料和方法: 实验材料: 乌鸡和家鸡血清及肝脏 实验方法: 血清胆固醇的定量测定(邻苯二甲醛法) 1、标准曲线的绘制取清洁干燥试管 5支,编号,按表 2加入试剂。表2 邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇——标准曲线的绘制 01234 标准胆固醇应用液/ mL 0 醋酸/ mL 0 邻苯二甲醛试剂/ mL 蒸馏水/ mL 混合酸/ mL 100mL 血清中总胆固醇含量/ mg 0 100 200 300 400 A 550nm 加毕,混匀,静置 10min ,以 550nm 波长比色测定,以吸光度值为纵坐标, 胆固醇含量为横坐标,做标准曲线。 2、样品的测定取2支清洁干燥试管,编号后,按表 3加入试剂。表3 邻苯二甲醛法测定血清总胆固醇——样品的测定对照样品醋酸/ mL 血清/ mL 邻苯二甲醛试剂/ mL0 无水乙醇/ mL 混合酸/ mL* * 硫酸含量的高低对显色有影响,故混合酸的配制和测定过程中的加量都应准确。显色时要避免高温,采用混合酸液反应时温度不会升得太高,一般在 4~32 ℃时,颜色能稳定 2h。加毕,混匀,静置 10min ,于550nm 波长比色,以对照管校零点,对照标准曲线即知 100mL 样品中总胆固醇含量( mg )。 血清清蛋白与γ- 球蛋白的分离与鉴定编号试剂编号编号编号编号编号试管试剂 血清清蛋白与γ- 球蛋白的盐析血清清蛋白与γ- 球蛋白的盐析实验步骤取离心管一支,加入 2mL 血清加入 2mLPBS (
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