AQP3基因敲除鼠及AQP8基因敲除鼠妊娠相关表型研究.pdf

广州医学院
硕士学位论文
AQP3基因敲除鼠及AQP8基因敲除鼠妊娠相关表型的研究
姓名:熊正方
申请学位级别:硕士
专业:妇产科学
指导教师:刘慧姝
20090501
基因敲除鼠及基因敲除鼠妊娠相关表型的研究中文摘要第一部分基因敲除鼠妊娠相关表型的研究硕士研究生:熊正方教授进行的大量研究表明水通道蛋白在体内液体转运生理中发挥重要作用。目前的研究已经【材料方法】本研究以纯合子基因敲除鼠鼠J笛樽椋嗤糯ū尘暗睦ッ魇笪6照组。纯合子基因敲除小鼠按雌雄的比列合笼交配,相同条件下进行昆明鼠合笼交配,检出阴道栓当日记为妊娠第一日咳战泻狭慌涞拇亢献覣蚯贸蠹袄ッ魇各刻旆直指导老师:刘慧妹水通道蛋白,悄にǖ赖鞍准易濉⑽5鹘诳缦赴胶獾难择性孔道,迄今在哺乳动物中已发现种水通道蛋白,它们由一系列具有同源性的内在膜蛋白家族成员组成,大多数选择性地分布在那些与体液吸收与分泌有关的上皮细胞及可能协同跨细胞转运的内皮细胞中。对人类蛲槐浜陀τ肁基因敲除鼠发现人和小鼠的胎盘胎膜中均有水通道蛋白⑺ǖ赖鞍的表达,提示、可能在妊娠生理中发挥关键作用。本实验应用基因敲除鼠和基因敲除鼠研究妊娠过程中表型变化,以寻找、在妊娠、胎儿生长发育及母胎液体平衡中发挥作用的直接证据。【研究目的】研究水通道珹在昆明鼠胎盘、胎膜组织的表达及分布情况,应用基因敲除鼠与昆明鼠对妊娠过程中相关表型进行分析,以便寻找在妊娠、胎儿生长发育及母胎液体平衡中发挥作用的直接证据。记录基因敲除鼠及昆明鼠受孕数,将两组鼠按孕龄,广州医学院硕士学位论文基冈敲除鼠及基因敲除鼠妊娠相关表型的研究
狙芯吭擞肦甈技术证实在昆明孕鼠胎盘、胎膜组织均有表达;运旒霸霢蚯贸蟮奶ヅ淌A亢吞ヅ毯烤笥谙嗤刑炖ッ蚯贸蟮难蛩吭谠焓苯侠ッ魇竺飨约跎伲以煅蛩ヅ蘃旧ǎ豪ッ魇筇ヅ蘃旧憬峁共愦吻宄幽柑逋赡げ嘀撂ザ嘁次为巨细胞滋养细胞层、海绵样滋养层及迷路样滋养层,而基因敲除鼠三层结构层次不清,海绵样滋养层的生长失去控制,成块生长并向迷路样滋养层侵入,使得迷路天、足月分娩治N甯鲂∽椋≡斐赡杲】道ッ餍∈蟮奶ヅ烫ツぷ橹例,运用逆转录一聚合酶链反应狿际跫觳饫ッ魇筇ヅ烫ツぷ橹兴ǖ赖鞍滓的表达。±ッ餍∈蠛虯蚯贸笤斓奶ヅ坦潭ㄓ%多聚甲醛后行染色及免疫组化,检测胎盘结构形态变化及在胎盘胎膜组织中的表达定位。直鸺锹济啃∽樽芘咛プ苁耙斐N跖咛ナ患锹几髯樵欤欤的胎鼠重量,胎盘湿重,胎盘干重,胎盘面积,胎盘含水量以及羊水量,并取孕的羊水样本测量离子成分及渗透压。臣蒲Х椒ǎ旱ヒ蛩胤讲罘治黾翱ǚ郊煅橛美醋鐾臣蒲Ъ觳狻【结果】用免疫组织化学技术对孕鼠胎盘和胎膜组织中的表达以及表达定位进行研究,发现在胎盘样本中在胎盘滋养细胞有定位表达,在胎膜中在羊膜上皮细胞表达。胂嗤糯ū尘暗睦ッ魇笙啾龋珹蛉笔Ш笕焉锵喙乇硇捅浠缦拢贸笫茉新拭飨越档停性缙孕基因敲除鼠的孕囊数目明显少于昆明鼠.。随着妊娠天数的延长,基因敲除鼠与昆明鼠孕囊数均有下降,但胚胎丢失率未见明显差异。蚯贸筇ナ笤谌焉臁旒靶律蟮奶逯亟舷嗤刑炖ッ魇竺飨降低...;鼠的胎盘湿量和胎盘含水量。尿素,琋水平升高,表现为渗透压升高。样滋养层细胞排列紊乱。【结论】广州医学院硕士学位论文基因敲除鼠及基因敲除鼠妊娠相关表型的研究
第二部分基因敲除鼠妊娠相关表型的研究瓵蚯贸笕焉锵喙乇硇头⑸浠体重减低,及胎盘结构改变;用免疫组织化学技术对惺筇ヅ毯吞ツぷ橹械腁泶镆约氨泶锒ㄎ唤醒芯浚发现在胎盘样本中在胎盘滋养细胞和羊膜上皮细胞有定位表达。素,琋,‘浓度升高,羊水渗透压增高。ッ髟惺筇ヅ獭⑻ツぷ橹蠥趍偷鞍姿降谋泶铮瓵笔Ш罂傻贾率茉新氏灾跎伲型砥谘蛩考跎伲蛩秆乖龈撸ナ狙芯课Kǖ赖鞍在妊娠、胎儿生长发育及母胎液体平衡中发挥关键作用提供直接证据。【关键词】水通道蛋白蚯贸螅焉铮柑ヒ禾迤胶【研究目的】研究水通道珹在筇ヅ獭⑻ツぷ橹谋泶锛胺布情况,应用基因敲除鼠与蠖匀焉锕讨邢喙乇硇徒蟹治觯员阊罢褹在妊娠、胎儿生长发育及母胎液体平衡中的直接证据。【材料与方法】本研究以纯合子基因敲除鼠鼠J笛樽椋嗤糯ū景的笪6哉兆椤H焉锾焓惴ā⑹笛榉椒ḿ巴臣蒲Х椒ㄍ谝徊糠帧【结果】:狙芯吭擞肦甈技术证实在惺筇ヅ獭⑻ツぷ橹斜泶铮辉胂嗤糯ū尘暗腃鼠相比,基因缺失后妊娠相关表型变化如下:蚯贸筇ナ笤谌焉臁旒靶律蟮奶逯孛飨灾赜贑鼠胎鼠及新生鼠...;霢蚯贸蟮奶ヅ淌V丶疤ヅ毯拷舷嗤刑霤鼠增加。霢蚯贸蟮难蛩拷螩鼠明显增多,且孕天羊水中尿ヅ蘃旧ǎ河隒鼠胎盘染色相比,基因敲除鼠胎盘镜下结构未见明显异常改变。【结论】广州医学院硕士学位论文基冈敲除鼠及基因敲除鼠妊娠相关表型的研究
狙芯课Kǖ赖鞍在妊娠、胎儿生长发育及母胎液体平衡中发挥关键作用提供瓹孕鼠胎盘、胎膜组织均有在和蛋白水平的表达;瓵蚯贸惺笕焉锵喙乇硇头⑸谋瓵笔Э傻贾卵蛩龆啵蛩秆股撸ナ笾亓吭黾樱ヅ淌V卦黾印直接证据。【