链霉素的生产..doc

链霉素的生产链霉素的生产链霉素的生产灰色链霉菌的扩大培养与保藏链霉素的发酵与过程监控链霉素的分离与效价测定灰色链霉菌的扩大培养与保藏种子扩大培养: 简称种子扩培. 是发酵工程的一个组成部分, 其实指将保存在砂土管、冷冻干燥管中处休眠状态的生产菌种接入试管斜面活化后, 再经过扁瓶或摇瓶及种子罐逐级扩大培养, 最终获得一定数量和质量的纯种过程。种子扩培所得的纯种培养物称为种子。种子扩培的一般过程: 斜面菌种→一级种子培养( 摇瓶)→二级种子培养( 种子罐)→发酵?种子应具备要求?总量及浓度能满足要求。?生理状况稳定,个体与群体区隔明显。?活力强,移种发酵后,能够迅速生长。无杂菌污染。?种子扩培的目的?接种量的需要。?菌种的训化。缩短发酵时间,保证生产水平。种子的制备工艺实验室种子制备阶段: 1 琼脂斜面 2 固体培养基扩大培养 3 摇瓶液体培养生产种子制备阶段:种子罐扩大培养斜面孢子培养?将砂土管( 或冷冻管) 保持的链霉菌孢子接种到斜面培养基,于 27℃下培养 7天。摇瓶种子培养待斜面长满孢子后,制成悬浮液接入装有培养基的摇瓶中,于 27℃下培养 45-48 小时,待菌丝生长旺盛。种子罐扩大培养取若干个摇瓶,合并其中的培养液将其接种 10% 于种子罐内已灭菌的培养基,通入无菌空气搅拌,在罐温 27℃下培养 62-63 小时,然后接入发酵罐内已灭菌的培养基中,通入无菌空气,搅拌培养,在罐温 27℃下,发酵约 7-8 天。幻灯片 8 斜面孢子培养:将砂土管( 或冷冻管) 菌种接种到斜面培养基上,经培养后即得原始斜面。斜面培养基: 可溶性淀粉 20g , 硝酸钾 1g, 氯化钠 , 磷酸氢二钾 , 硫酸镁 , 硫酸亚镁 , 琼脂 20g ,水 1000 毫升, - (配置时注意,可溶性淀粉要先用冷水调匀后再加入到以上培养基中) 配制: 按配方称量药品, 加热搅拌至琼脂完全熔化, 补水至 1000ml 。趁热分装于 18ml*180m l 试管,斜面以 8ml 为宜。分装完毕后,塞好棉塞并将试管捆扎好。高压蒸汽灭菌: 121 ℃灭菌 20min ,灭菌后趁热摆斜面。摇瓶液体培养摇瓶种子培养基: 豆饼粉 20g 、淀粉 40g 、酵母膏 5g、蛋白胨 5g, 硫酸铵 3g, 硫酸镁 , 磷酸二氢钾 ,碳酸钙 4g ,自来水 1000ml 、 - 。配制:取干净三角烧瓶, 250ml 三角瓶分装培养基 30-50ml ,用棉塞包扎瓶口,再加牛皮纸包扎,在 下灭菌 45-60min 。一、实验室种子的制备实验室种子的制备一般采用两种方式: 对于产孢子能力强的及孢子发芽、生长繁殖快的菌种可以采用固体培养基培养孢子, 孢子可直接作为种子罐的种子, 这样操作简便, 不易污染杂菌。对于产孢子能力不强或孢子发芽慢的菌种,可以用液体培养法。(一) 孢子的制备 1, 细菌孢子的制备细菌的斜面培养基多采用碳源限量而氮源丰富的配方。培养温度一般为 37℃。细菌菌体培养时间一般为 1~2 天,产芽孢的细菌培养则需要 5~10 天。 2, 霉菌孢子的制备霉菌孢子的培养一般以大米、小米、玉米、麸皮、麦粒等天然农产品为培养基。培养的温度一般为 25~28 ℃。培养时间一般为 4~14