植物的多倍体诱导及其观察实验报告..doc

植物多倍体的诱导及其鉴定一、实验目的 1 、通过实验,掌握化学诱导植物多倍体的原理以及方法,学习利用秋水仙素诱导植物多倍体的一般方法及多倍体诱导在植物育种上的意义。 2. 学习利用细胞学方法观察鉴定多倍体的特点以及诱导染色体加倍后的细胞学表现,利用染色体分析的方法对多倍体的细胞做出准确判断。二、实验原理生物体的细胞核中都有相对稳定的染色体数目,这是物种的基本特征之一。多倍体是细胞中具有 3个或 3个以上的染色体组的生物体。在植物育种上,利用多倍体可以改良作物的经济性状,同时还可以利用多倍体克服远缘杂交过程中的障碍。利用一些化学因素诱导植物产生多倍体,秋水仙素是诱导多倍体形成最有效和常用的药品之一,利用秋水仙素处理正在进行有丝分裂的细胞,可以抑制纺锤丝的形成,使细胞有丝分裂中期纺锤丝断裂或纺锤体形成受抑制,有丝分裂后期, 复制的染色体无法移向两级,细胞内的染色体加倍,形成多倍体。因此在适宜浓度的秋水仙素作用下,它既可以有效的阻止纺锤体的形成,又不至于对细胞发生较大的毒害,因此,细胞经一定时期后仍可恢复正常,继续分裂,只是染色体数目加倍成为多倍性细胞,并在此基础上进一步发育成为多倍体植物。将秋水仙素处理的植物根尖,制成临时装片,利用显微镜观察根尖分生区细胞中的染色体数目而确定是否形成染色体。三、实验材料、器具及试剂 1、实验材料: 发芽的蚕豆,蚕豆幼苗 2、实验器具:显微镜、解剖针、小试管、刀片、镊子、载玻片、盖玻片、吸水纸、试管、培养皿、烧杯。 3、实验试剂: 秋水仙素: % 浓度。卡诺固定液: 3份95%酒精与 1份冰醋酸配制而成。 1mol/l 盐酸, 45% 醋酸,改良苯酚品红, 70% 酒精。四、实验步骤 1 、取材: 将种子消毒,并于无菌水中浸泡 24 小时后,将蚕豆种子( 2n=16 )培养在培养皿内的湿滤纸上,室温或 28℃发芽,待胚根长达 1~2cm 时, 取出萌发的种子,用自来水洗 2~3 次,备用。 2、预处理:将胚根长到 1~2cm 的蚕豆种子移到盛有 % 秋水仙素的润湿的的吸水纸的培养皿内,室温下处理 48h, 待观察到根部有膨大时取出固定,与在水中进行培养的蚕豆种子(一般植物生长周期为 17~18h ) 做对照。同时,将实验组蚕豆根尖的生长情况与对照组的蚕豆根尖生长情况拍照做对比。 3 、固定:取出秋水仙素处理的蚕豆种子,用清水洗净萌发的蚕豆种子上的秋水仙素溶液,剪取约 长的根尖, 投入 carnoy 固定液中固定 24h , 清水洗净固定液,再移入 70% 酒精中保存,对照组的蚕豆根尖也需取 m长的根尖投入carno y固定液固定24h, 再移至70% 的乙醇中保存。 4 、解离: 将蚕豆根尖放入小试管中,加入 1mol/L 的盐酸,量没过根尖 , 在室温下解离 8~15min (解离可以使细胞之间的果胶层软化,经解离的组织可以使压片步骤顺利进行) 5 、染色: 倒掉解离液,用清水反复冲洗根尖,将根尖置于干净的载玻片上,滴加改良苯酚品红少许,染色 20~30min. 6 、压片: 用蒸馏水冲洗干净根尖上的染液,置干净载玻片上,滴加 45% 醋酸, 盖上盖玻片,其上放一片吸水纸,吸干多余染液的水分,左手指压住吸水纸的左边,右手指从吸水纸的左端向右方轻轻抹去,再用铅笔擦头从垂直均匀的