制药工程基础实验实验.doc

制药工程基础实验实验.doc实验一、培养基的配置与微生物的接种培养实验(一)实验目的:通过实验,使学生了解和掌握培养基的配置、消毒方法和接种与培养技术。了解微生物对营养物质的需求,不同微生物的生长差异。(二)实验原理:微生物必须在含有所需要的营养元素的培养基上才能生长,不同种类的微生物有它所适宜生长的培养基,细菌和真菌的培养基不同,在长期的实践中形成了有些著名的培养基配方和配置方法。微生物的培养过程中要防止其他微生物的存在和生长,因此在接种和培养过程中要进行灭菌和消毒,防止杂菌的干扰。灭菌方式中广泛使用的是蒸汽灭菌,即湿热灭菌。是热灭菌的好处是灭菌效果好,因蛋白质在含水时易变性,另外蒸汽穿透力大,含能量高。使用蒸汽灭菌器要注意排气完全,否则达不到灭菌温度。表1表示排空气程度与实际温度的关系。表1蒸汽火菌其中空气排除程度与器内温度的关系空气排除程度表压力(kPa)火菌器内的实际温度(°C)/.07100蒸汽灭菌器的压力有的以lb/i「(磅/英寸2)、?表示,现统一以帕(Pa)或千帕(kPa)表示,它们与温度的关系如表4・2。表2蒸汽压力与温度的关系蒸汽压力相应温度(°C)kPaLb/in2Kg/•的破坏情况分析方法糖名(10%糖液)(12TC)〜(〜118°C)~(113〜°C)100°C15min20min20min30min含量%破坏%含量%破坏%含晕%破坏%含量%破坏%°C时间min温度°C时间min脆弱假单胞菌5035伤寒沙门氏菌605氯针假单胞菌6010桑夫顿伯格沙门氏菌636*荧光假单胞菌5325金黄色葡萄球菌607赛氏杆菌(低温性)3030大肠杆菌615〜3()海产弧菌(低温性)2580结核杆菌4730鼠伤寒沙门氏菌55_*10产气肠细菌5060*指活菌数减少一个对数级即90%被杀死所需的时间。蒸汽灭菌适用范围很广,但主要是培养基的灭菌。在培养基灭菌中最需注意不要过多破坏营养,特别是糖类。糖类在湿热灭菌时破坏情况见表3。(三)实验材料大肠杆菌、红豆杉内生真菌。生化培养箱。超静工作台接种环或无菌牙签。酒精灯。无菌培养1111。肉汤培养基牛肉膏 水 100ml蛋白豚 PH %琼脂,即为固体完全培养基(CM)。:PDA):〜:先将新鲜无病害的马铃薯洗净,去皮后切成小薄片,称20克,加水100毫升,煮沸20分钟后过滤,其滤汁为马铃薯煮汁。然后加琼脂和蔗糖煮溶,后补足水分至100亳升,装培养皿灭菌备用。(四)操作步骤1按上述要求配置2种培养基,分别装入培养皿;2放入高压锅中蒸汽灭菌20min。3待培养基冷却凝固后,在两种培养基上分别接种大肠杆菌和红豆杉内生真菌。37°C培养。42天后检查生长情况。(五)实验结果与讨论如何保证灭菌效果?2不同种类的微生物菌落形态有何差异?3如何为微生物选择合适的培养基?(一) 实验目的:通过实验使学生了解显微镜的结构和使用方法,了解和掌握微生物的染色技术。(二) 实验原理:(三) 实验材料菌种 大肠杆菌,红豆杉内生真菌。染色液 草酸铉结晶紫染液;蕃红液。器具显微镜,香柏油,二甲苯,擦镜纸,载玻片。(四) 操作步骤将固定好的涂片加滴结晶紫Imin,若干了,还要补加染料。用缓冲流水去染料。加蕃红液复染30s。用缓冲流水冲去。用洗水纸吸干,直接用显微镜观察,先用低倍镜观察,然后用汕浸镜观察,作图。(五)染色操作步骤及注意点染色法可以看到染色操作包括制片、固定、染色、媒染、脱色、复染、水洗、干燥等步骤,每一步都具有其操作要点和注意点,若不当心,可能就得不到满意的结果。制片制片要采用干净的载波片,并注意接种环的无菌操作。做斜面菌体片时,要防止菌体和水混和不均匀有团结现象,注意菌体量适中。固定涂片后最好先在室温下自然干燥,