B7H1对同种异体小鼠角膜移植免疫赦免调控研究.pdf

一对同种异体小鼠角膜移植免疫赦免调控的研究课题来源:导师指定愣∽匀换鹣钅学位申请人指导教师答辩委员会主席吴京副教授副教授钟敬祥蓝育青广州专名称答辩委员会成员眼科学黄晓环于健邱波教授陈钧董冰松论文评阅人汤明芳月业南方医科大学级硕士学位论文.
酝忠焯逍∈蠼悄ひ浦裁庖赦免调控的研究硕士研究生:黄晓环指导教师:吴京副教授摘要研究背景及目的随着眼科学的发展,角膜移植手术己成为目前最常见的移植手术之一。人类角膜移植具有非常高的存活率,在无血管植床进行角膜移植的甏婊盥士高达%以上。然而,在血管化植床进行的角膜移植,其成功率较低。事实上,这些“高危”患者的移植排斥率与其他器官移植缟鲈唷⑿脑嗪透卧的排斥率相差无几。以此,对于整体角膜移植来说,免疫排斥反应仍是角膜移植失败的最主要原因。大量的研究工作已证实,角膜免疫排斥反应主要是馨拖赴榈嫉某俜型超敏反应。馨拖赴募せ钔ǔP枰A礁鲂藕糯碳ぃ阂桓鍪荰淋巴细胞通过其表面的馨拖赴芴,识别抗原递呈细胞,递呈的抗原肽,即主要组织相容性复合体琈毫硪桓鍪欠荕限制的协同刺激信号,即系挠盏夹怨泊碳し肿,隩淋巴细胞表面相应受体的结合。目前己发现的共刺激分子包括:/超家族、肿瘤坏死因子,/芴,家族。现在的家族包括个成员,;第椋./—籇疨狶瓾疘甃,前两个刺激分子硕士学位论文.
材料和方法的受体是程序性死亡分子琍,.的受体为:第椋築瓾和年,等从胎盘环状脱氧核糖核酸庵锌寺〉紹瓾颉等人在实验中发现,.在正常小鼠的角膜内皮细胞、深层的基质细胞及虹膜睫状体均有高度表达,而在角膜上皮及视网膜表面未见明显表达。.谡P∈蟮慕悄ぜ昂缒そ拮刺灞砻婢未见表达。但在移植术后的角膜移植片内皮及虹膜睫状体中,。热嗽谑笛橹型ü芴逍∈蟾骨蛔⑸淇固宸獗誃瓾.⑾挚固宸獗蘸蟮男∈蠼悄ぶ财婊钍奔浔榷哉兆槊飨运醵蹋抑财コ鱿峙懦猓崾綛瓾癙在角膜移植免疫赦免中发挥了重要作用。因此,研究角膜移植术后免疫赦免,对于进一步了解角膜移植术后免疫排斥反应的发生及可能机制有重要意义。本研究主要目的:研究一分子在角膜移植免疫赦免中的作用。包括以下主要内容:⒔⑼忠焯逍∈蠼悄ひ浦动物模型,观察术后排斥反应情况,了解移植术后小鼠角膜存活与排斥的情况。⒉捎妹庖咦榛Х椒ḿ觳夤泊碳し肿覤瓾谡P∈笱矍蜃橹耙浦彩后存活或排斥小鼠眼球组织中的表达情况,,。笛槎实验小鼠均为清洁小鼠级┨澹篊/皇芴澹築痚小鼠,ⅱ鬹龄,雌性,—=⑼忠焯逍∈蠼悄ひ浦捕锬P停鹾蠊鄄排斥反应指数的动态变化,于术后苋〔摹±砬衅懊庖咦橹Ъ觳将正常、排斥、存活∈笱矍蛘3ジ6砹止潭ǎ9中文摘要或,
石蜡包埋后连续切片,部分切片以苏木素及尹红染色,酒精脱水,中性树胶封片,显微镜下观察组织细胞学改变:以袂衅蠦瓾庖咦橹旧ǎ采用二步法,微波修复抗原,陨ǎ晕⒕迪鹿鄄臁7直鸾阎5难粜片设为阳性对照。所有的标本均以嬉豢棺魑R跣远哉铡O赴驶蛳赴核呈棕黄色至深棕黄色为阳性染色细胞。觳使用试剂盒为鶳提高纯度褂肨镜腜约梁货号逆转录提取样品1瓯鞠仍谝旱V醒兴椋渌僮靼此得魇进行。提取的分苯佑糜趒笛椤用以下引物为:上游瓵’上游瓹’下游瓵’反应体系如下:混合、模板⒁锔.⑺.反应总体积共。反应条件:个循环℃H芙庖嫦咛跫扛裘.,±表示。采用方差分析方法对各组W椤⒋。。硕士学位论文下游瓹’—甆鍻鍻一
结果结论小鼠原位角膜移植存活率为ィ忠焯逍∈蠼悄ひ浦泊婊盥饰ァ髯正常组、存活组及排斥组⊙矍蜃橹忻庖咦榛觳饨峁免疫组化结果显示,.分子主要集中在角膜深层基质及内皮层,可见明显的细胞核染色,上皮层未见明显表达。正常小鼠角膜及虹膜睫状体组织高度表达一分子,移植术后存活小鼠角膜及虹膜睫状体组织也高度表达一分子,。髯常组、存活组及排斥组〗悄ひ浦财衠觳饨峁在正常小鼠角膜组织中高度表达。将正常小鼠角膜移植到/∈笱矍蛏希珺瓾诖婊畹慕悄ひ浦财懈叨缺泶铮在发生排斥的角膜移植片中表达不明显,三组间差异有统计学意义.。同种异体小鼠角膜移植术后排斥率%,说明移植术后排斥反应仍是角膜移植失败的最主要原因;%的存活率提示,免疫排斥在小鼠角膜移植中并非绝对,免疫赦免在小鼠角膜移植中发挥了重要作用。泊碳し肿覤瓾谡P∈蠹耙浦彩鹾蟠婊畹男∈蠼悄ぁ⒑缒そ拮刺寰高度表达,而在移植术后发生排斥的小鼠角膜及虹膜睫状体组织均未见明显表达,说明一分子参与了同种异体小鼠角膜移植术后的免疫赦免反应,是维持眼角膜免疫赦免状态的重要因子之一。.
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