胶回收QC操作标准.doc

胶回收QC操作标准.doc琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型),第一个实验为GelRed染色法,第二个实验为EB染色法。%琼脂糖凝胶的制备(1) ,添加I25ml1XTAE溶液。(2) 轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室温2min。(3) 添加1XTAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。(4) 室温放置lOmin后将溶液倒入插有梳了的胶槽内,待胶块凝固后使用。(1) 取6个2ml离心管,依次编号为1-6号,使用分析天平准确称取空离心管的重量。(2) %琼脂糖凝胶胶块,放入已称重的2ml离心管中,称取胶块与离心管总重,计算凝胶块的重量。要求胶块重量不超过200mg为宜。(3) 添加溶胶液BindingSolutionB,要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ulBindingSolutionB,3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ulBindingSolutionB,5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ulBindingSolutionB.(4) 每管中添加50ulDL2502,混匀后置于60°C水浴5min,期间间断混合,直至凝胶块完全融化。【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。(5)将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中,室温放置2min,1OOOOrpm室温离心Imin,取出GenClean柱,并倒掉收集管中废液。(6) 将GenClean柱重新放I口I收集管中,加入500ulWashSolution,于12000rpm,室温离心Imin,倒掉收集管中废液。(7) 重复步骤(6)依次。(8) 将GenClean柱重新放回收集管中,12,000rpm,室温离心Imin,以彻底去除WashSolution0(9) ,在GenClean柱膜中央加入30ulElutionBuffer,37°C放置2min012,000rpni离心lmin0(10) 第一个孔道为4ul的DL2502,后面6个孔道为对应编号2ulDNA溶液,各孔道溶液均与lul预染loadingbufferGR0205混合后进行电泳检测,保存胶图。【注意事项】要求DL2502的9条条带全部回收成功,并且回收率达到80%以上。如下图所示:,对人体有一定的危害作用,整个实验过程须佩戴手套,并将使用过的手套、枪头等弃于EB污染废弃物专用区域,禁II:佩戴被污染的手套触碰非污染1乂域的物品。%回收胶的制备(1)(2)温2min«(3)(4),添加125ml1XTAE溶液。轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室添加1XTAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。室温放置lOmin后添加10ulEB溶液,,待胶块凝固后使用。