胶回收qc操作标准.doc

琼脂糖凝胶DNA回收试剂盒(离心柱型),第一个实验为GelRed染色法,第二个实验为EB染色法。%琼脂糖凝胶的制备(1),添加125ml1×TAE溶液。(2)轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室温2min。(3)添加1×TAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。(4)室温放置10min后将溶液倒入插有梳子的胶槽内,待胶块凝固后使用。(1)取6个2ml离心管,依次编号为1-6号,使用分析天平准确称取空离心管的重量。(2)%琼脂糖凝胶胶块,放入已称重的2ml离心管中,称取胶块与离心管总重,计算凝胶块的重量。要求胶块重量不超过200mg为宜。(3)添加溶胶液BindingSolutionB,要求1、2号管中每100mg琼脂糖凝胶加入200ulBindingSolutionB,3、4号管中每100mg琼脂糖凝胶加入300ulBindingSolutionB,5、6号管中每100mg琼脂糖凝胶加入400ulBindingSolutionB.(4)每管中添加50ulDL2502,混匀后置于60℃水浴5min,期间间断混合,直至凝胶块完全融化。【注意事项】观察各管内溶胶液溶解胶块的快慢程度。(5)将上述混合液转移至套放于2ml收集管的GenClean柱中,室温放置2min,10000rpm室温离心1min,取出GenClean柱,并倒掉收集管中废液。(6)将GenClean柱重新放回收集管中,加入500ulWashSolution,于12000rpm,室温离心1min,倒掉收集管中废液。(7)重复步骤(6)依次。(8)将GenClean柱重新放回收集管中,12,000rpm,室温离心1min,以彻底去除WashSolution。(9),在GenClean柱膜中央加入30ulElutionBuffer,37℃放置2min。12,000rpm离心1min。(10)第一个孔道为4ul的DL2502,后面6个孔道为对应编号2ulDNA溶液,各孔道溶液均与1ul预染loadingbufferGR0205混合后进行电泳检测,保存胶图。【注意事项】要求DL2502的9条条带全部回收成功,并且回收率达到80%以上。如下图所示:,对人体有一定的危害作用,整个实验过程须佩戴手套,并将使用过的手套、枪头等弃于EB污染废弃物专用区域,禁止佩戴被污染的手套触碰非污染区域的物品。%回收胶的制备(1),添加125ml1×TAE溶液。(2)轻微混匀后将其置于微波炉中,高火加热6min至溶液沸腾,取出锥形瓶放置室温2min。(3)添加1×TAE溶液至110ml,再次于微波炉中高火加热3min至溶液沸腾。(4)室温放置10min后添加10ulEB溶液,,待胶块凝固后使用。