【word】RNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNARNA加尾和引物延伸RT-PCR法实时定量检测microRNA北京大学(医学版)JOURNALOFPEKINGUNIVERSITY(HEALTHSCIENCES)Vol,39No,?87??技术方法?RNA加尾和引物延伸RT—PCR法实时定量检测microRNA张旗,何湘君,潘秀英(北京大学人民医院中心实验室,北京100044)[摘要]目的:用改进的RNA加尾和引物延伸RT—PCR法实时定量检测组织中的microRNAs(miRNAs),:提取组织中的小于200bp的RNA,用poly(A)聚合酶在其3末端加尾,再用5带40nt延伸序列的单碱基锚定Olig—dT引物进行反转录,得到约8Ont的cDNA,:该法线性范围宽,可检测低丰度的miRNAs,能特异区分3末端碱基不同的亚型,,,:该法可快速,敏感地检测不同组织中大多数miRNAs的表达差异,可用于寻找组织特异及疾病相关的miRNAs.[关键词]微RNAs;逆转录聚合酶链反应;实验室技术和方法[中图分类号][文献标识码]A[文章编号]1671—167X(2007)01-0087-05Real-timequantificationofmicroRNAsbyRNA-tailingandprimer-extensionRT-PCRZHANGQi,HEXiang-jun,PANXiu-ying(Cen~MLaboratory,PekingUniversityPeople?sHospital,Beijing100044,China)ABSTRACTObjecfive:T0optimizeandevaluatethemodifiedRNA—tailingandprimer—extensionRT—PCRmethodinrelativequantificationofmicroRNAs(miRNAs):Small—sizedRNAs(<200bp)wereextractedandpolyadenylatedbypoly(A)—basean—choredoligo—dTprimerswith40ntextensionattheir5一endswereusedtoreverselytranscribethepoly(A)—:——-——%:Thismethodenablesfastandsens
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