【doc】rna加尾和引物延伸法检测黑腹果蝇3种microrna表达量.doc

【doc】,李晓梅,陈永,钟国华(华南农业大学昆虫毒理研究室,广东广州510642)摘要:采用RNA加尾和引物延伸realtimePCR法实时定量检测了黑腹果蝇Drosophilamelanogaster的bantam,m扫一14,mir一2a共3种microRNA(miRNA)在各发育阶段组织中的相对表达情况,发现3种miRNA在不同发育时期的表达差异明显,其表达变化规律与文献报道基本一致,"加尾和引物延伸"方法,仅需1,10ng总RNA或等同物,检测范围可达7个数量级,:黑腹果蝇;microRNA;RNA加尾;引物延伸;定量检测002406中图分类号:$:A文章编号:1001—41lX(2011)O1—Real-TimeQuantificationof3microRNAsofDrosophilamelanogasterbyRNA-TailingandPrimer—ExtensionqRT-PCRQIXiao—xian,LIXiao—mei,CHENYong,ZHONGGuo—hua(LaboratoryofInsectToxicology,SouthChinangriculturalUniversity,Guangzhou510642,China)Abstract:—extensionqRT—PCRmethodwasusedtodetectrelativequantityof3microRNAs,bantam,mir一14andmir一2a,invariousdevelopmentalstagesinDrosophilamela—,-tailingandprimer-extensionhadadvantagesofhighsensitivity,whichonlyneeded1to10ngtotalRNAorequivalents,paredwithothermethods,whichwouldprovideareliablemeth—:Drosophilamelanogaster;microRNA;RNA-tailing;primer-extension;quantitativedetection微小RNA(microRNA,miRNA)是一类广泛存在于真核生物中的小分子非编码RNA,长约21,24nt,是生物体内天然产生的一群高度保守的短的单链RNA,,但不翻译成蛋白,作为转录后基因表达的调控者,它通过与靶标基因信使RNA(rues—sengerRNA,mRNA)的特定位点结合,抑制该基因编码蛋白的合成或诱导靶向mRNAs的降解或阻断其翻译过程,从而参与许多重要生理,,以黑腹果蝇Drosophilamelanogaster,蜜蜂Apismetl~ra,赤拟谷盗TriboliumcastaneumHerbstl3等已获得整个基因组序列的模式昆虫为研究材料的昆虫miRNA功能研究亦引起国内外的重视,并取得了许多重要成果,为阐明生命活动规律,研究人类重大疾病产生机理,探索疾病治疗新方案,寻找害虫防治新途径等提供了重要的参考-5].Ara—vin等报道在黑腹果蝇不同的生长阶段,miRNA表收稿日期:2010—04—06作者简介:戚晓娴(1985,),女,硕士研究生;通信作者:钟国华(1973,),男,副教授,博士,E—m