细胞染色方法总结.docx

Hoechst染色:hoechst可以穿过活细胞膜与细胞核结合 (主要为凋亡活细胞 )在紫外光下将核染为蓝色.Hoechst染细胞核会影响共聚焦显微镜对该样本其他荧光的观察效果.hoechst有hoechest33342 和大,但是 hoechst33342hoechst33258 两种 hoechsts33258对细胞的毒性作用更小一些,所以一般来说,hoechst33342 二者区别不hoechsts33258 用于细胞固定后再染色,而hoechst33342则可以对活细胞直接进行染色!染色步骤PI(PropidiumIodide 碘化丙啶)染色:是一种可对DNA染色的细胞核染色试剂,常用于细胞凋亡检测. 碘化丙啶(PropidiumIodide,PI)是一种核酸染料(红色),它不能透过完整的细胞膜,但凋亡中晚期的细胞和坏死细胞由于细胞膜通透性的增加,,只能表示细胞的坏死情况,而不是凋亡(当然晚期凋亡PI亦可着色)。但是如果您只是想知道细胞的死亡情况,而不是仔细区分坏死或凋亡,那么PI单一染色也可以。但是如果您一定要认定细胞的凋亡,那么PI单一染色显然不够!annexin-v染色细胞凋亡早期,,磷脂酰丝氨酸(Annexin-V,PS)外翻,Annexin-V在Ca+,Annexin-v染色阳性,-V结合不同的荧光抗体,就可以利用流式细胞仪、荧光显微镜以及共聚焦激光扫描显微镜检测细胞凋亡的发生。AnnexinV用FITC标记发绿色荧光;如果用PE标记就发红色荧光。JC-1染色JC-1是一种阳离子染料,可以在线粒体内聚集,低浓度时主要以单体(monomer)存在,发射光以绿光(~525nm)为主;而在高浓度时则可以形成多聚体(aggregation),发射光以红光(-590nm)为主。线粒体本身存在一定的极性2+ + +(polarization),其外膜为负极,内膜为正极。电位差由 Ca 、Na和H流调控。当线粒体状态良好时对 JC-l摄取量少,因而在线粒体内主要以单体的形式存在绿光强度/红光强度的比值较高。在线粒体发生去极化 (depolarization)时,线粒内JC-l的浓度较高,多以多聚体的形式存在,绿光强度/红光强度的比值降低。JC-1染色的绿光强度/红光强度仅取决于线粒体的膜电势 (membranepotential),而与线粒体的形态、体积和密度都无关,因而能更好地反映线粒体的功能状态。 由于凋亡发生的早期存在线粒体的去极性,因此, JC-1染色被用于检测凋亡的早期发JC-l染色非常简单。首先可将成品JC-1以DMSO配成储存液(1~5mg/ml),储存-20℃,用时以培养液稀释至10ug/ml终浓度。对贴壁细胞可以直接弃去培养液,漂洗细胞后直接加入染色液,10-30min后在荧光显微镜下或者激光共聚焦下观察。线粒体状态好时细胞以绿色为主,当红光信号增强时,红绿相叠,以橙色为主。该染色运用于悬浮细胞时还可以通过流式细胞仪进行检测,收集红/绿信号强度,计算其强度比。钙黄绿素-AM(Calcein-AM):Calcein-AM本身并不是荧光分子,但通过活细胞内