人羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤的研究.pdf

郑州大学
博士学位论文
人羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤
姓名:王公平
申请学位级别:博士
专业:神经外科
指导教师:杨波;宋来君
20090501
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人羊膜间充质千细胞移植治疗大鼠脑损伤摘要研究背景:脑损伤是严重威胁人类健康的疾病之一。目前对重度脑损伤导致系,具体的确切机制仍需进一步研究。目前移植干细胞治疗脑损伤的途径有脑损采用何种移植途径能最大程度改善宿主的神经功能,尚没有明确的结论。对各种移植途径进行治疗效果系统比较的研究报道尚未见到,实验将给与探讨,为干细大鼠脑损伤的研究方面,应用舜殴舱褚浅晒辛嘶钐骞鄄欤〉昧寺博士研究生王公平导师杨波宋来君的神经功能缺失,治疗难以达到满意的效果。近年来干细胞研究的进展给脑损伤的治疗带来了希望,取得了令人鼓舞的治疗效果。干细胞移植治疗脑损伤能够改善宿主的神经功能,可能的机制有:外源性干细胞在宿主体内的内分泌作用和机体自身神经细胞的旁分泌作用,使局部的神经营养因子聚集,改善了神经细胞的生存环境,使外源性干细胞更易向神经细胞转化并与宿主的神经细胞建立突触联伤区原位移植、通过脑脊液循环及血液循环进行移植,均能对神经功能有所改善。胞移植治疗脑损伤提供实验依据。干细胞移植治疗脑损伤的研究手段多是采用处死动物后获取组织标本,进行病理学的观察。如何活体观察外源性干细胞在宿主体内的存活情况,是干细胞移植研究的难点和重点。在小鼠胚胎干细胞移植治疗意的观察效果。在人羊膜间充质干细胞移植治疗脑损伤的研究方面,报道较少,有关活体示踪羊膜间充质干细胞在宿主体内存活情况的研究也没有见到报道。本文采用人羊膜间充质干细胞进行体外标记后移植治疗脑损伤大鼠,舜殴振活体示踪细胞的存活迁移情况。研究表明,神经生长因子对神经元的生长分化及功能的维持具有重要作用。神经生长因子诱导干细胞向神经元样细胞转化的研究已有多篇报道,联合神经生长因子与外源性干细胞移植治疗脑损伤有人进行了研究,对宿主神经功能的改善有一定作用。在脑损伤区长期维持神经生长因子的有效浓度,是神经生长因子联合干细胞移植治疗脑损伤的关键问题,由于神经生长因子通过血脑屏障能力弱,郑州火学博士学位论文人羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤R
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方法:目的:姆椒ǎ坏诙教钟τ昧孔拥闵窬ひ蜃幽擅琢:虵擅卓帕菲至%ト诤希:谋壤×/密度接种进行传代培养。取第外周血管给药的途径难以有效进入脑损伤区,另外神经生长因子半衰期短,难以在脑损伤区长久维持有效浓度,因此如何使神经生长因子进入脑损伤区并维持有效浓度仍需进一步研究。本文采用量子点观察神经生长因子纳米化后进入羊膜间充质干细胞的情况,通过羊膜间充质干细胞携带神经生长因子进入脑损伤区,取得了满意的效果。外源性干细胞移植入机体后,对宿主的影响目前尚无明确结论,仍需要研究人员进行探讨。本文通过采集血液检测血常规及肿瘤标志物,了解干细胞移植对脑损伤大鼠的影响,并通过核磁共振观察有无新生物出现。综合以上研究情况,我们将在人羊膜问充质干细胞移植治疗脑损伤的移植途径、神经生长因子的给药方法、羊膜间充质干细胞移植治疗脑损伤对机体的影响及活体示踪进行探讨,为脑损伤的临床治疗提供依据。第一,探讨体外分离、培养和纯化羊膜间充质干细胞力磁昙茄蚰目尚行约笆屎咸跫⑻;第四,探讨羊膜间充质干细胞移植治疗脑损伤的安全性。第一,羊膜的分离培养与鉴定无菌条件下取正常足月剖腹产胎盘的羊膜,生理盐水充分冲洗后,用サ囊鹊鞍酌甘椅孪,然后用含甇疞胶原酶的/嘌嫦痩目滤网过滤,制成单细胞悬液,用含%胎牛血清現腄疐培养基进行培养。添加碱性成纤维生长因子进行细胞培养,培养瓶置于、饱和湿度体积分数为培养箱中培养,后全量换液,去除未贴壁细胞,每炕灰骸4赴蚰昧魇较赴羌觳釳拿庖弑硇虲珻琀的表达。取第难蚰疞和疞全反式维甲酸盏寂嘌南赴蛏窬赴只S谟盏记凹坝盏己分别进行神经巢郑州大学博士学位论文人羊膜间充质干细胞移植治疗大鼠脑损伤R,Ⅱ
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,观察。纳米颗粒进入细胞情况。蛋白琻神经元特异性烯醇化酶琋徒褐氏宋嵝缘鞍珿免疫细胞化学染色。第二,量子点神经生长因子纳米粒—、擅卓帕菲力磁标记羊膜及诱导分化待第三代羊膜间充质干细胞达到%%融合时用疞胰酶消化,接种于孔培养板上,每孔坪玫男〔F糜谂嘌澹赴缆〔片后,培养基中分别加入不同浓度。纳米颗粒及狽,。纳米颗粒标记组分为对照组及实验组,对照组为不含铁纳米颗粒培养基培养的羊膜,实验组分为四组,使。,继续培养堋S谙赴嘌、周和芙衅章呈坷度旧ā—昙