AB荧光定量PCR仪使用维护校准标准操作规程.docx

文件名称AB7500荧光定量PCR仪使用、维护、校准标准操作规程颁发部门A—R 制订人:复核人:[批准人:、徉口甘匸质保部44t lt甘r(+复核日期:于批准日期力宀口执行日期小汀H/八业—[f\ 夕编号 SOP04006制作份数修订记录修订人发送口部门修订原因修订内容版本修订日期目的:确保荧光定量PCF仪能够正确和正常的使用,保证扩增及结果分析的标准化、规范化。范围:适用于AB7500荧光定量PCF仪的使用及维护定义:无职责:荧光定量PCF仪使用人员负责本规程的实施质保部对本规定的有效执行承担监督检查责任内容:〜30C,相对湿度45〜75%,进入 Windows界面。522接着打幵AB7500仪器电源幵关,预热10分钟。,打开软件。,待托盘弹出后,将所需检测的 8联PCR反应管或者96孔PCR反应板放入检测孔位,记下放置位置。检测8联PCR反应管用**反应孔模块,检测96孔PCR反应板用**反应孔模块。(检测8联PCR反应管需放入盖紧管盖的空8联PCR反应管配平,检测96孔PCF反应板无需配平)。:例如新建一个UG-63-62的模板,扩增参数是95°,10';(95°,10〃;63°,45〃)X5cycles;(95°,10〃;62°,35〃)x40cycles,在62。时收集荧光信号(HEXFAM言号),20^1反应体系。在Setup-PlateSetup-argetsandSamples中,将TargetName下的Target1改成FAM点击AddNewTarget,将新增的Target1改成HEX点击Reportee下拉菜单,选择VIC。在Setup-RunMethod-GraphicalView中的ReactionVolumePerWell后面输入20(20口1反应体系)。选中第一个HoldingStage,点击DeleteSelected删除;在CyclingStage中的NumberofCycles后输入5,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度63度,输入时间45秒,将63度下面收集荧光图标点掉;点击AddStage下拉菜单选择Cycling,在CyclingStage中的NumberofCycles后输入40,在Step1中输入时间10秒,在Step2中输入温度62度,输入时间35秒,在62度下面点击图标收集荧光。,文件名输入UG-63-62,保存在默认ab7500-config-tamplates文件夹内,关闭设置界面。:在软件 Home界面中点击Template,选择需要的模板,点击打幵。例如:UG-63-62,其扩增参数就是95°,10';(95°,10〃;63°,45〃)X5cycles;(95°,10〃;62°,35〃)x40cycles,在62°时收集荧光信号(HEXFAM信号),ReactionVolumePerWell:20口l(20^1反应体系)。在Setup-PlateSetup-AssignTargetsandSamples中选择8联管摆放的位置,全部勾选Sample1;UGT1A1*6勾选HEXUGT1A1*28勾选FAM在Run-Amplification Plot中点击STARTRUN命名为20140101-1(当日日期+当日上机次数,例:2014年1月1日第1次上机编号为20140101-1),保存在默认文件夹中,开始运行。结果分析PCR反应结束后自动保存结果,对扩增曲线进行分析。也可根据分析后图像调节 Baseline的Start值、End值以(用户可根据实际情况自行调整,Start值可以在3〜15、End值可设在5〜20),Threshold值(Rn)推荐设定为5000〜15000,点击Analyze进行分析,然后到Plate窗口下记录每个反应的Ct值。(切勿打幵管盖),顺序关闭AB7500软件、定量PCR仪电源,关闭电脑。。如需要,将实验文件归档或备份。? 至少每周检查一次计算机磁盘空间。? 如果硬盘的可用空间不足其总容量的 20%应将较陈旧的数据传输到备份存储设备上保存。关闭控制7500Instrument的计算机,30秒后再次幵启计算机。用无绒布块(不脱毛)蘸取 75%酒精清洁7500Instrument 的表面。(注:切勿使用有机溶剂清洁7500Ins