溶菌酶的提纯结晶和活力测定实验报告doc资料.doc

溶菌酶的提纯结晶和活力测定姓名: 学号: 班级: 指导老师: 一、实验前言 ( lysozyme )是一种能够水解细胞壁成分中 N- 乙酰胞壁酸与 N- 乙酰葡萄糖胺之间的β-1,4 糖苷键的酶,被广泛应用于医药、食品工业、生物工程等方面,现从鸡蛋蛋清中提取溶菌酶已达到工业化生产水平。蛋清中的溶菌酶含量越高, 酶活力越强, 越有利于鸡蛋的保存, 因此测定鸡蛋蛋清中的溶菌酶对我国溶菌酶生产、禽蛋产品加工有重要的指导作用,也为蛋品质评定提供了一个重要参数。活力测定的基本原理是用一种细菌悬液作为基质, 加入待测标本后保持一定时间, 如样品中含有溶菌酶则细菌被溶解, 即其细胞壁不溶性多糖变成可溶性粘肤。测定方法很多: 如平皿测定法、光电比浊法、粘度测定法、分解产物测定法( 因为底物往往过量, 通常不用底物)、化学滴定法、分光光度法及同位素技术, 其中以平皿测定法和比浊法最为常用。溶菌酶分布很广, 而且不是单独存在的, 往往是和许多因子共同作用、相互协调。同时, 可以直接或间接地通过酶的分解产物而起作用。在这里许多问题正处于摸索阶段, 有些方面通过特定的实验, 预测其应用。而这些特定的实验往往对某种或某一个动物而言, 还有其局限性。未定论的问题很多, 许多应用尚未大面积使于临床, 但是溶菌酶必将越来越引起人们的重视, 特别是其广布于人体, 在医药、科研方面的作用尤为重要. (l) 抗菌溶菌酶不但作用于革兰氏阳性细菌, 而且它作为一种非特异性免疫, 即对所有的病原微生物都有一定程度的抵抗力, 没有特殊的选择性, 对身体的自然防御起很大作用. 如鼻粘膜, 口腔中含有一些溶菌酶, 临床用于治疗副鼻窦炎和龋齿; 眼泪和白血球中溶菌酶含量最高,因此在干燥综合症诊断上, 认为泪液溶菌酶值的下降可以提供敏感可靠的指标, 并能反映泪腺受损程度; 在白血病患者的尿中, 含有大量溶菌酶, 临床上可有效地诊断白血病。白血球中的溶菌酶在脱颗粒过程中被排列到噬菌体内, 噬菌体感染宿主( 抗原)后, 诱导产生溶菌酶(抗体), 这种溶菌酶是噬菌体染色体组, 通过细胞壁分解酶和膜多糖分解酶的作用而表现, 其主要功能一是使噬菌体产生吸附作用, 二是使噬菌体向宿主菌体内注入 DNA, 溶菌酶在噬菌体侵入宿主菌细胞和溶菌的整个过程中都起着重要作用, 此溶菌酶( 抗体) 和补体共同作用,使某些微生物敏感, 因此, 溶菌酶可能和噬菌体内其他抗微生物系统有协同作用, 主要作用是消化细菌, 而不是杀死细菌。普遍认为, 这种白细胞具有抗肿瘤作用和治疗由细菌、病毒引起的炎症。以上这种抗原—抗体反应也可以在体外进行溶菌反应, 即血清学反应, 可解析细菌表层结构和作为研究分子生物学的材料, 通过它寻找新酶类, 也可用做病毒性传染病的诊断。(2) 抗病毒一方面如流行感冒和腺病毒, 可能它的蛋白质外壳具有溶菌酶的作用点, 现已证明, 腺病毒在人体内引起呼吸道炎症, 在实验动物中引起肿瘤。因此, 用溶菌酶可以治疗呼吸道疾患, 抗动物肿瘤。另一方面溶菌酶作用的细菌产物可诱发产生干扰素, 而干扰素主要功能是抗病毒。(3) 提高抗菌素疗效因为抗菌素是微生物合成的代谢产物, 通过抑制细菌细胞壁肤聚糖及核酸和蛋白质的合成, 影响细胞膜, 因而具有抑制或致死其他微生物的作用。而溶菌酶也作用于细胞膜, 与抗菌素合用