p100蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义研究.pdf

天津医科大学
硕士学位论文
p100蛋白在肝癌组织中的表达及临床意义的研究
姓名:黄丽
申请学位级别:硕士
专业:基础医学;免疫学
指导教师:杨洁
2012-05
中文摘要研究目的:原发性肝癌是目前我国最普遍的恶性肿瘤疾病之一。由于不同的基因表型和个体差异以及广泛的危险因素,肝癌的发病机制尚未明确。肝癌因其发病隐匿,发现时多为晚期,预后较差。因其对化疗不敏感和对放疗的耐药性,所以肝脏切除和肝脏移植是目前唯一的根治疗法,但根治性切除后患者的复发率高、转移率高,这成为肝癌临床治疗的难题。蛋白是一种多功能蛋白,在一些恶性肿瘤的研究中,发现蛋白在肿瘤的发生发展中扮演重要角色。因此我们推测蛋白有可能参与调控肝癌的形成。本课题旨在深入研究蛋白在肝癌的发生、发展及临床特征之间的关系,期待从分子生物学水平探讨蛋白作为肝癌检测标记的可行性。方法:本课题分三部分进行,通过组织水平、细胞水平和活体水平三个层次的实验,研究蛋白在肝癌发生发展过程中所发挥的作用。第一部分研究蛋白在临床肝癌组织标本中的表达情况。选取天津市第三中心医院手术切除并经病理证实的例肝癌标本作为实验组,所有病例在术前均未接受化疗、放疗或其他抗癌治疗,并有完整的随访资料。另取例相应癌旁正常组织作为对照组。采用免疫组化法检测肝癌组织、癌旁正常组织中蛋白的表达水平;分析上述指标与肝癌肿瘤大小、病理类型、组织分化程度及远处转移的关系。第二部分为构建抑制蛋白表达的稳定肝癌细胞株。首先构建针对基因的小发夹瑂《颈泶镌靥澹ü胞包装后产生的病毒感染细胞,获得稳定沉默的细胞系。荧光显微镜下观察感染效率,利用方法检测稳定细胞株中的沉默效果。第三部分观察慢病毒介导的聊琾蚨匀烁伟┞闶蟪闪的影响。利用前期已稳定感染.《驹靥宓娜烁伟㏒胞接种于/闶蟊巢嗥は拢鄄炻闶蟪闪銮榭觥R月《究赵靥甯腥咀作为阴性对照组。结果:①免疫组化染色结果显示:蛋白在肝癌组织的肝细胞胞浆均有较强表达,在癌旁正常组织中亦有表达。┳橹衟母弑泶镉胗形蘖馨徒嶙R啤⒂形拊洞ψR萍天津医科大学硕士研究生论文
关键词:⒉±砝嘈汀⒅瘤大小、腹水等无关.②通过技术鉴定,干扰后细胞株中蛋白表达水平明显降低。成功构建了具有干扰效果的慢病毒载体,并获得了稳定沉默及对照的细胞株。⑧成功构建出人肝癌裸鼠移植瘤模型,表达下降后会抑制细胞的成瘤能力。结论:①蛋白在肝癌组织中高表达,并与肝癌的分化程度、有无远处转移及有无淋巴结转移密切相关。提示蛋白参与了肝癌的发生发展。②成功构建了具有干扰效果的慢病毒干扰载体及稳定沉默的细胞系。为进一步研究在肝癌细胞中的调控作用及机制提供了可靠的体外细胞模型。③基因沉默能有效抑制人肝癌裸鼠成瘤生长,表明在肝癌发生发展中起到作用。天津医科大学硕士研究生论文
...琩琫.,甌..,../
—:②③:天津医科大学硕士研究生论文%..甦...
缩略语鷒缩略词心英文全称中文译名过硫酸氨腺瘤状结肠息肉蛋白环磷酸腺苷效应元件结合蛋双蒸水焦碳酸二乙酯脱氧核糖核酸达尔伯克改良伊格尔培养基二甲基亚砜溴化乙锭病毒细胞核抗原埃希氏大肠杆菌乙二胺四乙酸胎牛血清疏水簇分析肝细胞癌辣根过氧化物酶天津医科大学硕士研究生论文牛血清白蛋白白染色异粘蛋白—猠甤’疭
鐰斟小干扰魽信使光密度聚丙烯酰胺凝胶甿磷酸盐缓冲液蛋白酶抑制剂聚偏二氟乙烯核糖核酸扇盏嫉某聊春咸小核核糖核酸十二烷基硫酸钠葡萄球菌核酸酶短发夹状三羟甲基氨基甲烷缓冲盐溶液峁褂胸腺嘧啶核苷三羟甲基氨基甲烷天津医科大学硕士研究生论文碘化丙锭前体庑窤琋,琋’募谆狟琋,琋’一
舱峁褂富含尿嘧啶小核核糖核蛋白免疫印渍天津医科大学硕士研究生论文甊
研究现状、成果肝癌刖吾肝癌是我国最普遍的恶性肿瘤疾病之一。在我国,每年有万人被检测患有肝癌,并有万例患者死于肝癌【。根据世界卫生组织年的统计数据,中国男性患者和女性患者的肝癌致死率在世界各国家中的排名分别为第六位和第九位8伟┰谖夜亩喾⑿院透咧滤缆恃现赜跋炝人民的生活质量并消耗了大量的社会财富。在多年致力于肝癌诊断和治疗的过程中,我们发现仍有很多难题尚未攻克,迫切需要对肝癌的发病机制进行深入的分子水平的研究。图伟┰谥泄推渌业闹滤缆剩堇丛从贑天津医科大学硕士研究生论文..—一
淠遗鵈童嚣置互函俾蛾儇痒嗄灿鱟蛋白口口如蚐也具有相似的调节作用舯】。,从酵母到人类中都有存在。蛋白具有鐾暾暮个不完整的葡萄球菌核酸酶同源结构域⒃贑端具有一个唇峁褂图【。蛋白能够通过其结构域与一系列的