2021年型高效液相色谱仪操作规程.doc

Ultimate3000型高效液相色谱仪操作规程一、开机前准备工作检验设备电源、流路、信号连接是否完好。流动相:配制对应流动相,µm微孔滤膜抽真空过滤后,超声脱气15分钟,必需使用色谱纯溶剂,水或缓冲盐溶液要用超纯水;盛放样品溶液和流动相所用玻璃容器必需用超纯水清洗。样品溶液:按方法取样或配制标准样品溶液,µm滤膜过滤。二、仪器组成及开机平衡系统仪器组成:本仪器由Ultimate3000分离单元、DAD-3000(RS)检测器、Chromeleon7色谱工作站和打印机组成。Ultimate3000分离单元包含四元梯度洗脱溶剂输送系统,四通道在线真空脱气机,可容纳120个样品瓶自动进样系统,柱温箱,内置柱塞密封垫清洗系统,溶剂托盘,液晶显示器,键盘用户界面及软盘驱动器。开机:依次接通Ultimate3000分离单元、检测器、计算机和打印机电源。接通Ultimate3000分离单元后,仪器开始自检约20s,打开电脑,双击电脑右下角变色龙软件服务管理器,单击“开启Chromeleon仪器控制器”,激活服务管理器,双击电脑桌面“Chromeleon7”图标,进入变色龙软件。脱气(Degasssger):向上掀开泵头前面板,拧松快速清洗阀(逆时针两圈左右),然后按“冲洗”键,,5min将自动停止。若想手动停止,只要再按“冲洗”键,将停止清洗。清洗有缓冲盐那个通道前后,一定要用超纯水清洗管路和泵头,以预防缓冲盐溶液直接和纯有机相混合而产生结晶堵塞百分比阀。清洗完成,先停泵,再拧紧快速清洗阀。切记不要在泵未停止清洗前拧紧快速清洗阀。编辑仪器方法在ChromeleonConsole“创建”菜单中点击“仪器方法”。采集时间和采集通道设置:在弹出“仪器方法向导”窗口中输入分析运行时间;在“诊疗通道”项下点击“取消选择全部通道”,点击下一步。LPG-3400SD泵常规设置:在溶剂名称下面方框中输入所用流动相名字,如“%A:水,%D:甲醇”。在“压力限值”处压力下限设置为5bar左右,可防治流动相走完时,仪器空走。压力上限设置为400bar。最大流速加速度和减速度可设置为3ml/min2,点击下一步。泵流速梯度设定:在“流速梯度”窗口中,图示为所设定梯度曲线,下表中列有时间、流速、各通道流动相百分比及梯度曲线。点击“删除平衡阶段”,然后再各项下输入对应值,在设定梯度过程中能够点击右边“插入”行和“删除”行进行编辑。对反相色谱而言,通常梯度过程为水系百分比越来越小,有机百分比越来越多。WPS-3000:自动进样器常规设置:通常吸收速度设置为2µl/s,吸收延迟为7s,排出速度为10µl/s,取样高度为2mm,进样冲洗设置为BeforeInject,冲洗体积75µl,冲洗速度4µl/s,点击下一步。进样模式:分析型液相色谱通常采取默认设置,低压梯度泵需勾选“和泵同时进样”,点击下一步。TCC-3100柱温箱常规设置:若需对色谱柱进行正确控温,则勾选“使用温度控制”,然后在“温度”后输入需要温度值。其它各项均可采取默认值,点击下一步。UV(DAD-3000RS)紫外二极管阵列检测器通道设定:二极管阵列检测器能够同时选择4个紫外通道采集数据,能够分别设定需要检测波长,需要采集3D光谱时要选上3DFIELD,常规分