大块异种脱细胞骨基质的制备及组织相容性的研究.pdf

石河子大学
硕士学位论文
大块异种脱细胞骨基质的制备及组织相容性研究
姓名:尹来波
申请学位级别:硕士
专业:人体解剖与组织胚胎学
指导教师:刘维钢
2011-06
摘要


目的:探讨大块异种脱细胞骨基质( Acellular bone extracellular matrix ,ABECM)的制备及组织相容
性,为其在骨缺损修复领域中的临床应用提供实验依据。

方法:取牛股骨下端松质骨切割制作 cm× cm× cm 及 cm× cm× cm 大小的骨
块,两种骨块分别用 10% NaCl 和 %曲拉通 X-100 联合脱细胞处理,分为 48 h 三个时间
段;处理后的大块异种脱细胞骨基质行 HE 染色,Masson 染色及扫描电镜观察,观察大块异种脱细
胞骨基质的脱细胞程度;用处理后的大块异种脱细胞骨基质制作浸提液,行急性毒性实验、热源实
验,观察大块异种脱细胞骨基质有没有毒性反应及热源性;用处理后的大块异种脱细胞骨基质材料
与 SD 大鼠骨髓间充质干细胞体外复合培养,观察细胞生长、细胞增殖及蛋白质含量测定。

结果: (1)×× 经过 10%NaCl 和 %曲拉通 X-100 联合处理 72h、96h 及 cm
×× 经过 10%NaCl 和 %曲拉通 X-100 联合处理 96h 三组的异种 ABECM 经 HE 染色
及扫描电镜观察未见细胞成分,Masson 染色观察胶原纤维基本结构未被破坏,材料浸提液急性毒性
实验、热源实验符合规定标准,且骨髓间充质干细胞能够贴附在异种脱细胞骨基质孔隙内生长,细胞
生长及蛋白合成功能不受异种脱细胞骨基质的影响。(2)×× 经过 10%NaCl 和
%曲拉通 X-100 联合处理 48h 及 ×× 经过 10%NaCl 和 %曲拉通 X-100 联合
处理 48h、72h 三组的异种 ABECM 与 BMSCs 复合培养,通过细胞计数及细胞蛋白含量测定,在试
验后期对照组在细胞数量及蛋白含量上都多于实验组,表明上述三组大块异种 ABECM 脱细胞程度
不完全,对 BMSCs 的生长有一定的影响。

结论: (1)本试验制备复合条件的大块异种 ABECM,说明利用高渗 NaCl 与曲拉通 X-100 联合脱
细胞的方法是可行的。(2)大块异种脱细胞骨基质具有良好的组织相容性, 可根据临床大块骨
缺损的实际形状、大小等需要,方便地切割制作大块异种 ABECM 支架材料,更好地满足临床
大块不规则骨缺损修复的需要,大块异种脱细胞骨基质可作为骨缺损修复的支架材料。

关键词:大块;异种;脱细胞骨基质;制备;组织相容性

论文类型:A(基础研究)



I
Abstract
Objective: To explore the best methods of preparation of massive heterogenous acellular bone extracellular
matrix (ABECM) and its patibility , to provide experimental basis for the clinical use in the bone
reconstruction field.

Methods:Bovince lower femur cancellous bone was cut into ×× and ××
,then were approached acellularly by 10 % sodium chloride and % TritonX-100 with three time
periods of . Specimens were stained with HE ,Masson and observed with naked
eyes ,microscopy and scanning electron microscopy ,to observe the acellular degree of ABECM;To
evaluate the patibility through acute toxicity test and pyrogen test; Bone marrow mesenc