生理指标测定..docx

实验
植物叶绿素含量的测定（分光光度法）
（生理生化，1996, p103）
一、 原理
根据叶绿体色素提取液对可见光谱的吸收，利用分光光度计在某一特定波长测定其吸光度， 即可用公式计算出提取液中各色素的含量。根据朗伯一比尔定律，某有色溶液的吸光度 A与其中溶质
浓度C和液层厚度L成正比，即A=a CL式中：a比例常数。当溶液浓度以百分浓度为单位，液层厚 度为1cm时，a为该物质的吸光系数。各种有色物质溶液在不同波长下的吸光系数可通过测定已知浓 度的纯物质在不同波长下的吸光度而求得。如果溶液中有数种吸光物质，则此混合液在某一波长下的 总吸光度等于各组分在相应波长下吸光度的总和。这就是吸光度的加和性。今欲测定叶绿体色素混合 提取液中叶绿素a、b和类胡萝卜素的含量，只需测定该提取液在三个特定波长下的吸光度 A,并根据
叶绿素a、b及类胡萝卜素在该波长下的吸光系数即可求出其浓度。在测定叶绿素 a、b时为了排除类 胡萝卜素的干扰，所用单色光的波长选择叶绿素在红光区的最大吸收峰。高等植物中叶绿素有两种： 叶绿素a和b，两者均易溶于乙醇、乙醚、丙酮和氯仿。叶绿素 a和叶绿素b的比值反映植物对光能 利用效率的大小，比值高则大，比值小则反之。
二、 材料、仪器设备及试剂
（一） 材料：新鲜（或烘干）的植物叶片。
（二） 仪器设备：1）分光光度计；2）电子顶载天平（）; 3）研钵； 小漏斗；6）定量滤纸；7）吸水纸；8 ）擦境纸；9）滴管。
（三） 试剂：1） 95%L醇（或80%^酮）；2）石英砂；3）碳酸钙粉。
三、 实验步骤
（1） 取新鲜植物叶片（或其它绿色组织），擦净组织表面污物，剪碎（去掉中脉）
（2） ，分别放入研钵中，加少量石英砂和碳酸钙粉及 研成均浆，再加乙醇10ml，继续研磨至组织变白。静置 3〜5mi n。
（3） 取滤纸1张，置漏斗中，用乙醇湿润，沿玻棒把提取液倒入漏斗中，过滤到 用少量乙醇冲洗研钵、研棒及残渣数次，最后连同残渣一起倒入漏斗中。
（4） 用滴管吸取乙醇，将滤纸上的叶绿体色素全部洗入容量瓶中。直至滤纸和残渣中无绿色为止。 最后用乙醇定容至25ml，摇匀。
（5） 把叶绿体色素提取液倒入光径1cm的比色杯内，
定吸光度。
四、 实验结果计算
4）棕色容量瓶；5 ）
，混匀。
2〜3ml 95%乙醇,
25ml棕色容量瓶中,
以95聽醇为空白
，在波长663nm和645nm下测
叶绿素a的含量=
叶绿素b的含量=
叶绿素 a、b 的总含量= OD663 + OD645
注意：，避免造成测定误差
，以免浪费试剂，如果浓度太高可进行适当稀释
OD663 -
OD645 -
OD645
OD663
实验二不良环境对植物细胞膜的伤害
一、 原理
植物组织在受到各种不利的环境条件（如干旱、