市售菌的分离鉴定大实验报告.doc

《微生物学大实验》
市售食品中腐败菌的分离纯化及其生物学性状的观察

姓名：刘晓雪
班级：食品科学与工程2班
指导教师：关桦楠
同组人：陆婧婧、姜磊、贾玲、隋颖、李虹颖、张凯
实验报告成绩：
前言
食品腐败变质是指食品受到各种内外因素（例如温度，气体等）的影响，造成其原有物理性质或化学性质发生变化，降低或失去其营养价值和商品价值的过程。食品腐败变质的过程实质上是食品中碳水化合物、蛋白质、脂肪在污染微生物的作用下分界变化、产生有害物质的过程。 本次实验以鱼排为材料，它里面含有碳水化合物、蛋白质、无机酸、维生素、有机酸和大量的水分 PH 一般偏向酸性（—）这些条件都很适合微生物的生 长繁殖。这些微生物大部分是嗜酸性微生物即霉菌、酵母菌和某些细菌。我们运用营养琼脂培养基、麦芽汁培养基、马铃薯培养基、平板划线、点植、涂布等方法从中分离出腐败菌，观察和分析其菌种及菌落形态。食品中腐败菌的主要是大肠菌群，大肠菌群是人及动物肠道中的正常寄居菌，食物或水中大肠菌群的检出意味着直接或间接的近期粪便污染。大肠菌群作为饮水、食品等的粪源性污染卫生细菌学指标，而且在外界存活时间与一些肠道病原菌相似，它的出现可能意味着某种肠道病原菌如沙门氏菌、志贺氏菌的存在。大肠菌群是国际上公认的卫生监测指标，因此大肠菌群的检测技术十分重要。
二、实验材料药品和仪器
实验材料
市售食品鱼排在18℃—22℃，湿度为59%，放置3-4个星期
实验药品
营养琼脂培养基、马铃薯培养基、麦芽汁培养基和乳糖胆盐培养基；葡萄糖糖发酵试剂盒、乳糖糖发酵试剂盒、麦芽糖糖发酵试剂盒和蔗糖糖发酵试剂盒；无菌水、番红、结晶紫、酒精、碘液、美蓝。
仪器设备
显微镜、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅、恒温培养箱、冰箱、电磁炉等、烧杯、量筒、大试管、小试管、锥形瓶、培养皿、无菌移液管、酒精灯、接种环、天平、胶塞、胶头滴管、报纸、皮筋、标签等。
三、实验方法
食品中腐败菌的分离
（1）将市售食品鱼排1-2 g（自行定量，饮料样品可直接使用）捣碎并置于100 mL无菌水中，充分震荡制成混悬样品液。
（2）培养基的制备：
营养琼脂培养基： g营养琼脂粉，加入100 mL水加热溶解，分装，在121℃下蒸汽灭菌。20 min后取出导入无菌平皿中冷却凝固。
马铃薯培养基：将去皮土豆200 g切成2 cm左右小块加入1000 mL水煮沸10 min，过滤补充水份，加入20 g琼脂粉，20 g葡萄糖，加热溶化，分装，121℃下蒸汽灭菌20 min。
麦芽汁培养基：称取5 g麦芽粉加入100 mL和2 g琼脂，在121℃下蒸汽灭菌20 min。
（3）采用平板划线法分离细菌（营养琼脂培养基）：将混合菌分离样品摇匀，接种环火焰灭菌后，在火焰边取出试管塞，火焰灭菌后至少凉4秒，再将接种环插入样品试管中，取出样品，并将试管塞塞紧，左手掀开皿盖，右手持接种环，自皿的一边开始轻轻的来回划线。
（4）采用涂布法分离酵母菌（麦芽汁培养基）：取少量样品液（ mL）滴加到培养基表面。将沾有少量酒精的涂布器在火焰上引燃，待酒精燃尽后，冷却8~10 s，用涂布器将样品液均匀地涂布在培养基表面，涂布时可转动培养皿，使菌液分布均匀。
（5）采用点植法分离霉菌（马铃薯培养基）：接菌环轻微接触食品腐烂处，然后点植在培养基表面，一般点6个点。
（6）把不同类型的培养基放入到培养箱中，28-30℃倒置培养。

（1）腐败菌中细菌的观察鉴定（革兰氏染色法）：
在载玻片中间滴一滴生理盐水，点燃酒精灯，接种环在酒精灯附近灭菌，后在营养琼脂培养基上取样，均匀涂片。固定时通过火焰1-2次，不可过热，以载玻片不烫手为宜。滴加初染液草酸铵结晶紫1滴，约1 min后，水洗。加碘液媒染1 min，并覆盖约一分钟，水洗。95%酒精脱色处理，观察流出液的颜色，衬以白色背景，无色时，脱色终止，马上水洗并吸干。加番红复染1-2 min，水洗。镜检 油镜观察，革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色，以分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，常常呈假阳性。
（2）腐败菌中酵母菌的观察鉴定
%吕氏碱性美蓝染液，按无菌操作法在营养琼脂培养基上取培养48小时的菌种少许，放在吕氏碱性美蓝染液中，使菌体与染液均匀混合。用镊子夹盖玻片一块，小心的盖在液滴上，该片时应注意，不能将盖玻片平放下去，应先将盖玻片的一边与液滴接触，然后将