高效液相色谱HPLC简介.ppt

高效液相色谱（HPLC）简介
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HPLC (High Performance Liquid Chromatography ) —高效液相色谱法
是一种区别于经典液相色谱,基于仪器方法的高效能分离手段:
高性能色谱柱,高精度输液泵,高灵敏度检测器…
广泛应用于各个领域:
医药,环保,石化,生命科学,食品工业,农业…
无论在技术上,理论上,还是在应用上仍处于发展阶段
什么是高效液相色谱(HPLC)？
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液相色谱分析法
（一）高效液相色谱分析的流程
　1、由泵将储液瓶中的溶剂吸入色谱系统，然后输出，经流量与压力测量之后，导入进样器。
2、被测物由进样器注入，并随流动相通过色谱柱，在柱上进行分离后进入检测器，检测信号由数据处理设备采集与处理，并记录色谱图。
3、废液流入废液瓶。
遇到复杂的混合物分离（极性范围比较宽）还可用梯度控制器作梯度洗脱。这和气相色谱的程序升温类似，不同的是气相色谱改变温度，而ＨＰＬＣ改变的是流动相极性，使样品各组分在最佳条件下得以分离。
（二）高效液相色谱的分离过程　　
同其他色谱过程一样，ＨＰＬＣ也是溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换过程。它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差别使不同溶质得以分离。
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操作过程图示
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色谱分离的机理
分离是一个
物理的过程。
固定相(Stationary Phase)
流动相(Mobile Phase)
样品 (溶解于流动相中的溶质)
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HPLC的特点
项 目
高效液相色谱法
气相色谱法
进样方式
样品制成溶液
样品需气化或裂解
流动相
溶液
惰性气体
分离原理
吸附、分配、筛析、亲和等
吸附和分配
检测器
UVD、PDAD、RID等
TCD、FID、ECD等
应用范围
低、中、高沸点有机化合物
离子型无机化合物
热不稳定化合物
生物活性分子
低沸点有机化合物
永久性气体
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高效液相色谱仪构造
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HPLC的仪器配置及流程
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检测器简介（一）
◆　紫外吸收检测器（UVD）
原理：用特定波长的紫外光照射样品池，通过检测透光率的变化来测定样品浓度的检测器。它具有波长固定，波长可变和光二极管阵列三种类型。
特点：选择性检测器、对流量和温度敏感性低、灵敏度较高（10-9g）。
◆　折光指数检测器（RID）
原理：监测参比池和测量池中溶液的折射率之差来测量试样浓度的检测器。
特点：通用性检测器，温变化要保持在±℃、灵敏度低（10-6g）。
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