国家二级保护药用与观赏植物金毛狗的孢子繁殖技术初探.doc

摘　要:从野外采集的金毛狗孢子经过消毒处理后,分别播种于未经消毒和经过消毒处理的3种培养土上,在保证水分条件的情况下,分别在自然环境和无菌的人工环境条件下进行分组繁殖试验。结果表明:培养土以原生境土为最好,培养条件以人工无菌环境的白天光照和自然变温为最好;从配子体的受精到孢子体的形成是整个孢子繁殖过程的关键。
关键词:金毛狗;孢子繁殖;培养条件;分组实验
金毛狗属(Cibotium)的蕨类植物[1],又名金毛狗脊。该种植物不仅是我国典型的单科种植物[2],更是历史悠久的药用植物,其根状茎可长年采收入药,具有通血脉、利关节、强腰背、壮筋骨、治顽痒等多种功效[3]。由于其赖以生存的森林环境被严重破坏,再加上人们对野生植株进行私挖乱采,导致其野生资源已经处于濒危状态,因此被列入了国家二级保护植物和限制出口物种名录[2]。
尽管有关金毛狗的研究报道较多,但多集中在化学成分分析、遗传多样性、配子体发育和产品开发方面[4-7]。为了进一步做好该物种的资源保护和合理利用工作,如何利用人工手段来迅速增大其个体数量是当务之急。根据前人经验[8],对蕨类植物的孢子进行人工繁殖,具有繁殖系数大、繁殖成本低、变异性小等特点,是人工快速繁殖育苗的有效途径,因此,通过对金毛狗的孢子进行了人工繁殖试验,已取得了相应的研究成果,现报道如下。
1　材料与方法
11　试验材料
111　孢子的采集　金毛狗的孢子采自重庆缙云山,采集孢子时将背面有成熟孢子囊的羽片剪下装入干净的白色纸袋,放置于室内的通风干燥处,以便使孢子自然脱落。经过1周左右,在装有孢子囊羽片的白色纸袋外面轻轻拍打,以便使已经开裂的孢子囊内的孢子充分脱落出来,取出羽片后把纸袋内的孢子倒在孔径02 mm的金属筛上过筛,以便去除其它杂质,过筛后的孢子用棕色广口瓶保存备用。
112　孢子的消毒处理　孢子在播种前最好进行消毒处理,以避免有害微生物的污染。处理方法为:用滤纸将称量好的每份为2 mg的孢子包成一小包,并用细线扎紧;将孢子小包先在70%的酒精中浸泡30 s左右,此时还要用镊子将滤纸包中的气泡赶净,以使孢子表面完全被酒精浸润;然后将滤纸包放入5%的NaClO溶液中浸泡5~10 min,捞出后用无菌水冲洗4~5次;在无菌培养皿中小心打开纸包,用10 mL的无菌水将滤纸上的孢子全部冲入培养皿中形成无菌孢子悬浮液;将培养皿中的孢子悬浮液倒入无菌三角烧瓶中,并用少量无菌水把培养皿冲洗干净后全部倒入三角瓶中。
113　播种器皿　为了便于管理和降低成本,播种器皿为具有良好排水性能、口径12 cm的白色塑料花盆,播种前清洗干净,并用沸水浸煮5 min左右进行消毒处理。
114　培养土　据前人经验[8],试验选用腐叶土、混合土(腐叶土、田园土和河沙以体积比为1∶1∶1均匀混合)以及从金毛狗原生境地采来的表层土(以下简称原生境土)等3种培养土。把这3种培养土晾干后用较细的土壤筛过筛,为了进行对比,过筛后的每种播种基质平均分为二部分,其中一部分不作消毒处理,另一部分放入干燥箱中,在
120℃高温下干燥6 h进行消毒处理。
12　方法
121　播种　把干燥的播种基质装入花盆并平整表面后,用盆浸法[9]对其进行充分湿润,然后用经过灭菌处理的胶头滴管将三角瓶中的孢子悬浮液均匀地喷洒到培养土表面。为了保证每份孢子悬浮液都