用于毒素检测的酶联免疫吸附测定elisa的研究.pdf

浙江大学
博士学位论文
用于毒素检测的酶联免疫吸附测定(ELISA)研究
姓名:李冬阳
申请学位级别:博士
专业:生物系统工程
指导教师:应义斌;吴坚;;
2012-05-31
摘要上的创新,蛋白和分别为典型的大分子和小分子抗原,依此对象建立的新有机化学和分析化学等诸多领域的知识,以大分子的内毒素;虻鞍證和小分子的真菌毒素魄苟舅谺珹为对象,研究了用于毒素检测的酶联免疫吸附成功应用于转基因蛋白的检测,为研发具有自主知识产权的高通量、自动化免疫合感藕欧糯蟮募浣泳赫ǎ?7⑿滦偷腅试剂盒和诊断试纸等提供了理论椒ǎ⒂牖诿副臧宓木銭和基于磁珠的手动磁辛吮冉稀转基因蛋白和黄曲霉毒素分别为最重要的转基因作物成份和致癌性最强、天然发生的真菌毒素,皆关乎民生。开发针对这两种毒素的快速检测方法对于日益高涨的农产品与食品安全检测、环境监测等需求有着十分重大的实用意义。本课题侧重于方法学方法也可以相对容易地推广到其它大分子和小分子分析物的检测;为拓展到致病菌、农药小分子等检测提供新的方法依据,服务于农业、食品、环境安全等。本课题综合利用光学、免疫学、农业与食品科学、材料科学、纳米技术、生物化学、测定路椒āMü灾频哪擅状胖楹蜕桃祷暮怂岽炕低常嵘嗣庖叻治的自动化程度,。探索性地提出了觳獾男路绞揭患行木拐ê突诰依据。主要研究结果和结论为:约滋サ鞍为模型,建立了一种基于磁珠转运的半自动酶联免疫测定结果表明:通过水热法自制的磁珠粒径均匀,直径约璨惆桶被奘后仍保有良好的磁响应能力;用戊二醛两步法链接的抗体和氨基化磁珠痬的最优比例为“固澹磁珠;将商业化核酸纯化系统中的磁珠转运功能用于实现磁免疫分析的自动化是可行的,由此建立了一种灵敏的、基于磁珠转运的半自动.;狤的灵敏度.·/哂诰銭,且更加省时省力,,但更省时省力,能实现高通量检测。⒘薓—觳庾;虻鞍證=峁砻鳎核确ㄖ票傅磁珠具有顺磁性,¨
芟迪略赑、/单克隆抗体对瓵屑行募觳馐强尚械模徊捎蒙锼乇昙堑腁固謇和变异系数小,优于采用生物素标记的抗体;经优化的夹心竞争法诙蔚拿副和线性范围等性能上相当,~.ズ.%;直接竞争法的组内和组间变异系数基于生物素标记的黄曲霉毒素抗体土芯酆螲酶的链霉亲和素甈,,并和传统间接竞争法进行了系优浓度组合为...夹心体系扩展到检测蒊蛋白的间接夹心体系是可行的;瓻检测的,凶奔洳怀芄患觳獬龅椭/的蛋白,与商业化的蛋白约梁屑觳庑阅芟嗟薄岢隽艘恢钟糜谛》肿蛹觳獾腅新方式一夹心竞争法,并与传统的直接竞争法进行了系统比较。结果表明:,而把其上面连有的小分子当成这个新抗原大分子的新表位,使用相同的作为二抗时,,引入自由的可以实现对瓵藕诺囊种疲佣迪至硕孕》肿覣的夹心竞争检测;对抗体进行生物素标记或酶标记作为二抗,都能实现夹心竞争法检测;采用酶标记抗体的夹心竞争法检测时间更短,所得校正曲线的背景噪声记抗体,∈,坏诙蔚拿副昙强固澹:稀释诹槊舳取斐鱿尬性范围为..恢苯泳赫ǖ腎参.—线性范围为..分别为~.ズ..ァ肓司酆侠备趸锩作为信号分子进行信号放大,建立了统比较。结果表明:甋浣泳赫ㄓ呕蟮淖钣排ǘ茸楹衔猙.。传统竞争法中作为检测抗体,幕魄霉毒素单抗和作为示踪抗体,拿副昙强故驣抗体的优化后最。=.、.;—...浙江大学博士学位论文摘要
关键词:酶联免疫吸附测定,毒素,转基因,,甲胎蛋白,黄曲霉毒素,磁珠,生物传感器,夹心竞争法,聚合辣根过氧化物酶,~叮欢员确⑾郑的信号指示能力是同浓度酶标记抗鼠固宓丁浙江大学博士学位论文摘要
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致谢光阴荏苒,如白驹过隙。转眼间,求是园里求学的五载,装着过往的喜怒哀乐向记忆中奔腾而去,也悄然把我送到了毕业的时节。终于,我等来了五年来最想写的卷