实验题目:血红蛋白测定与红细胞计数实验题目:血红蛋白测定与红细胞计数检验诊断学教研室检验诊断学教研室张群智张群智教授教授实验目的要求: 实验目的要求: 通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求: 通过血红蛋白测定、红细胞计数实验要求: 1 1、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方、掌握红细胞计数、血红蛋白测定的原理、方法及注意事项。法及注意事项。 2 2、掌握血细胞计数板的结构、掌握血细胞计数板的结构一、血红蛋白测定一、血红蛋白测定(Hemoglobin (Hemoglobin 简称简称 Hb Hb ) ) (氰化高铁血红蛋白法) (氰化高铁血红蛋白法) 【【原理原理】】血红蛋白中的亚铁离子( 血红蛋白中的亚铁离子( Fe2+ Fe2+ )被高铁氰)被高铁氰化钾氧化成高离子( 化钾氧化成高离子( Fe3+ Fe3+ ),血红蛋白转化成),血红蛋白转化成高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与氰离子( 高铁血红蛋白,高铁血红蛋白与氰离子( CN- CN- ) ) 结合,生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电结合,生成稳定的氰化高铁血红蛋白。用光电比色计在比色计在 540nm 540nm 波长比色。从波长比色。从 参考液制作参考液制作的标准曲线上读取血红蛋白克数。的标准曲线上读取血红蛋白克数。【【操作操作】】取试剂取试剂 5 5毫升加入血液毫升加入血液 20ul 20ul 混匀置混匀置 5 5分钟后分钟后用用 721 721 光电比色仪, 光电比色仪, 540nm 540nm 波长,试剂为空波长,试剂为空白调白调 0 0点比色,读取光密度,查标准曲线得点比色,读取光密度,查标准曲线得结果。结果。红细胞计数红细胞计数(red blood cell (red blood cell 简称简称 RBC) RBC) ————显微镜直接计数显微镜直接计数( (试管法试管法) ) 【【原理原理】】一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀一定量的血液经一定量等渗性稀释液稀释后,充入血细胞计数池中显微镜下计数释后,充入血细胞计数池中显微镜下计数一一定容积内的细胞, 定容积内的细胞, 再换算成每升标本的细胞再换算成每升标本的细胞数报告。数报告。【【操作方法操作方法】】 l l 、取红细胞稀释液、取红细胞稀释液 毫升,放入一小试毫升,放入一小试管内。管内。 2 2、用血红蛋白吸管吸血至、用血红蛋白吸管吸血至 l0ul l0ul 处。处。 3 3、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛、擦去管尖外部余血将血液迅速轻轻吹入盛有红细胞稀释液的试管内,吸上清液嗽洗吸管有红细胞稀释液的试管内,吸上清液嗽洗吸管 2-3 2-3 次,立即摇匀。次,立即摇匀。 4 4、用玻棒取混悬液少量,充入计数池内。、用玻棒取混悬液少量,充入计数池内。 5 5、待、待 2 2——3 3分钟,让红细胞完全下沉后,将计分钟,让红细胞完全下沉后,将计数板平放在显微镜台上,用低倍镜观察,如数板平放在显微镜台上,用低倍镜观察,如红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞分布均匀即可换高倍镜进行计数。红细胞计数的区域红细胞计数的区域: :中心大方格中的中心大方格中的 5 5个中方格个中方格( (正中一个和四正中一个和四角各一个角各一个) )。。
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