不同模式死亡细胞对巨噬细胞分泌炎性细胞因子的调节作用.pdf

南方医科大学
硕士学位论文
不同模式死亡细胞对巨噬细胞分泌炎性细胞因子的调节作用
姓名:刘璇
申请学位级别:硕士
专业:免疫学
指导教师:孙尔维
20090410
性细胞因子的调节作用不同模式死亡细胞对巨噬细胞分泌炎硕士研究生:刘璇指导老师:孙尔维摘要背景细胞死亡是多细胞生物的重要生命过程之一,在生物体的发育、防御及自琍,使得它们能快速被吞噬细胞所吞噬,并引起相应的免组织炎症反应和损伤的细胞死亡过程。近年的研究证明,两种不同死亡方式的细胞在自身免疫、肿瘤免疫、感染免疫以及移植免疫等过程中均发挥重要的对于死亡细胞调节免疫反应的机制,作者的导师首次提出了“细胞死亡方式”们既往的研究表明:凋亡细胞能够抑制赴罨⒀映ひ浦参锎婊畈⒂盏济庖耐受。文献报导坏死细胞能够活化免疫系统,增强抗感染能力。但是对于不同方式死亡细胞如何调控免疫反应,尤其是其对吞噬细胞功能的影响仍不清楚。在革兰氏阴性细菌感染时会释放大量脂多糖琇,產紫赴樗,.、白细胞介素硕士学位论文稳过程中起重要作用。死亡细胞表面表达的特异性标志物如磷脂酰丝氨酸疫学事件。吞噬细胞识别的死亡细胞可分为两种:凋亡细胞和坏死细胞。凋亡且恢殖绦蚧摹⑿枰O哪芰康摹⒉灰鹱橹字⒎从退鹕说细胞死亡过程,坏死是一种非程序化的、不需要消耗能量的、引起作用。免疫识别理论模型,认为凋亡细胞诱导免疫耐受而坏死细胞诱导免疫应答。我血液循环。已知梢约せ罹奘上赴头胖琢龌邓酪蜃觓
赠,用含ヌヅQG濉锨嗝顾睾痬疵顾氐腞嘌/链霉素的澧鳎嘌吹次后,、环境中培养。⒔橹剩辗⑷硌字⒎从目的节作用,并阐明其可能的分子机制,为“细胞死亡方式免疫识别模型”这一假说提供实验依据。方法∈±砩硌Ы萄惺医S陆淌诶瓻赴呐嘌小鼠馨拖赴闑赡戏揭娇拼笱庖哐Ы萄惺腋荒淌诶≡煤∈蟾骨痪奘上赴姆掷牒团嘌鼠,无菌锤垂嘞锤骨唬錾海煤%胎牛血清、/青霉素和蛲龊突邓老赴闹票无菌操作取/笮叵俨⒎掷肓馨拖赴猛耆嘌鵕髡诱导小鼠胸腺细胞凋亡条件:培养皿直径ヌヅQG宓腞中文摘要综合症。由于炎症部位往往同时存在广泛的细胞坏死和细胞凋亡,那么在细菌感染、细菌代谢产物存在的情况下,坏死细胞或凋亡细胞是否会调控细菌感染所引起的免疫反应呢4耍颐悄馐紫韧ü,探讨不同方式死亡细胞本身以及在碳は露酝淌上赴功能的影响。研究和比较不同模式死亡细胞被吞噬后对巨噬细胞分泌炎性细胞因子的调在℃、环境中培养。%胎牛血清、/青霉素和/℃、肪持信嘌取茏笥业腂痗鼠,腹腔注射无菌液体石蜡,天后放血处死小细胞浓度为痬Ⅱ
培养基厝姿珼ǘ×,含%⒕奘上赴退劳鱿赴墓才嘌P⒕奘上赴胨劳鱿赴蚅作用下的共培养模型加入⒌鹘谥张ǘ任/,%跸浞跤后收集上清,嘞赴蜃拥募觳以甈⌒酒低澈托∈,比较实验组与对照组之间的差异。∈⑾郑杂谛∈,℃水浴加热收集处理后的细胞检测凋亡/坏死率,按凋亡检测试剂盒的操作说明书进行。∈蟾骨辉奘上赴治组,即对照组、凋亡细胞处理组蛲鲎和坏死细胞处理组邓雷。对于凋亡组和坏死组,将巨噬细胞分别与比率的凋亡/坏死细胞共培养。而对照组以等体积完全培养基培养。%跸浞跤后收集上清,.保存。照组、凋亡组和坏死组,凋亡组和坏死组巨噬细胞分别与比率的凋亡/坏死细胞共培养,对照组加入等体积完全培养基作为空白对照处理。共培养后,保存。胞共培养物上清中细胞因子。采用
腺淋巴细胞凋亡的诱导,盏挤飨杂庞赨虼宋颐嵌訢诱导方法进行了深入探讨。发现影响细胞凋亡的主要因素有:ǘ龋赴ǘ龋跤奔洹对盏挤ǚ锤囱芯浚⑾种票冈缙诘蛲鱿赴淖罴烟跫#合赴ǘ痬珼浓度。,孵育时间。此条件诱导的凋亡细胞,应用流式细胞计数法得出早期凋亡率制备凋亡细胞的最佳条件为:,照射距离,照射时间凋亡细胞处理过的巨噬细胞再予以碳ぃ嘌锷锨逯醒字⑿韵赴蜃邓老赴芄挥盏季奘上赴字⑿砸蜃印S攵哉兆橄啾冉希牖邓老赴共培养后的巨噬细胞,产生炎症性细胞因子的能力明显增强。而且,坏死细胞处理后的巨噬细胞再用碳ぃ奘上赴字⑿。结论血清的嘌,ǘ×,细胞浓度痬跤奔。%,照射距离丈涫奔,孵育检测各组炎症细胞因子产生情况。结果显示,凋亡细胞能够抑制巨噬细胞在中文摘要ィ砥诘蛲雎剩邓缆释砥诘蛲鱿赴数为..%。跤奔。此条件诱导的凋亡细胞,应用流式细胞计数法得出早期凋亡率ィ砥诘蛲雎剩邓缆..%。细胞坏死的诱导方法均