烟草黑胫菌拮抗放线菌的筛选、鉴定及其生防效果的研究.pdf

山东农业大学
硕士学位论文
烟草黑胫菌拮抗放线菌的筛选、鉴定及其生防效果研究
姓名:张茹萍
申请学位级别:硕士
专业:植物病理学
指导教师:张广民
2011-06-09
山东农业大学硕士学位论文
中文摘要
烟草黑胫病(Phytophthora parasitica var. nicotianae)是烤烟生产上主要的病害之一,
我均每年的烟草黑胫病发病面积达76373hm2,×107kg,造成的损失
达一亿元以上。对于该病的防治,目前主要采用化学农药防治,随着化学农药引起的环
境污染以及人们公认的3R(抗性、残毒、再猖獗)问题的出现,利用自然环境中的拮抗
微生物防治植物病害愈来愈受到人们的重视。放线菌是拮抗微生物的重要来源,在植物
病害的生物防治中占有重要地位。本试验从采自山东几大烟区的烟草根围土壤中分离筛
选出对烟草黑胫病菌有拮抗效果的放线菌,进行温室控病研究及菌株的鉴定,并进一步
对发酵条件、发酵产物的稳定性及促生作用进行了研究。试验结果如下:
1. 采用稀释平板法从土壤中分离到 125 株放线菌。采用平板对峙法和菌丝生长速率
法相结合对其进行初步筛选和再次筛选,经初步平板筛选后,获得了对烟草黑胫病菌拮
抗活性较强的 8 株放线菌菌株。经发酵液再次筛选发现在这 8 株菌株中菌株 97 对烟草
黑胫病菌的抑菌效果最好,抑制率达 58%。菌株 97 菌体及其产生的拮抗物质除对烟草
黑胫病菌有较强的抑制作用外,还对供试的其他 13 种病原真菌都有一定的抑制作用,
尤其对苹果轮纹病菌,菌丝生长抑制率达 68%。
2. 对菌株 97 的形态和培养特征观察、生理生化特性分析、细胞壁组分测定及 16S
rRNA 序列分析结果表明:该菌内菌丝无横隔、不断裂,气生菌丝多分枝。孢子丝长直
或弯曲,孢子短杆状,表面光滑。细胞壁化学组分 I 型,糖型 C 型,表明该菌株属于链
霉菌属(Streptomyces);同时,在以 16S rRNA 序列为基础构建的系统发育树中,菌株
97 与淡紫灰链霉菌(Streptomyces lavendulae)的同源性最高,为 %。初步鉴定,
菌株 97 为淡紫灰链霉菌(S. lavendulae)。
3. 为了提高活性物质产量,对菌株 97 的培养基进行了筛选并对其发酵工艺条件进
行了初探。得到培养基最佳配方为: 小米 g,葡萄糖 g, 碳酸钙 g,氯化钠
g,蛋白胨 g。最佳发酵工艺条件为:种子液菌龄 36h,接种量 6%,发酵时间 120h,
培养基初始 ,装液量为 50mL/250mL 三角瓶,发酵温度 28℃,摇床转速 180r/min。
4. 对菌株 97 发酵液的稳定性测定结果表明:发酵液在 4℃条件下储藏稳定性更好,
在偏酸性或中性条件下稳定,有较强的热稳定性和抗紫外线照射能力,对蛋白酶 K 稳定
性较好。
5. 通过温室盆栽试验和皿内沙培试验,考察了菌株 97 五种不同浓度的发酵液对烟
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草黑胫病的防治效果及对烟草幼苗的促生作用。结果表明:10 倍稀释液的预防效果最好
且最稳定达到了 %,并且 10 倍稀释液对烟草种子的发芽率、苗高、苗重、根长及
根重都产生了一定的影响,能够很好的促进烟苗的生长。
关键词:烟草黑胫病;拮抗放线菌;鉴定;发酵条件;防治效果
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Abstract
o blank shank (Phytophthora parasitica var. nicotianae)is one of the more
important diseases during o production. The o area of blank shank disease is
76373hm2 and the yield loss is ×107kg counting up to more than 1x108RMB per year
in China. The norma1 control strategies are main in using chemical fungicides. Along with the
appearance of environmental pollution caused by chemieal pesticide and 3R induding
Resistance, Residue, Resurgence, Utiliz