可溶性糖测定.doc

引言可溶性糖包括葡萄糖、果糖、蔗糖等单糖和双糖,是植物品质的重要构成性状之一, 尤其是以果实为目的产品的植物,可溶性糖与酸的含量及其配比是影响果实风味品质的重要因素。对于鲜食品种,一般来讲,高糖中酸,风味浓,品质优;低糖中酸,风味淡, 品质差。因此,可溶性糖的定量研究对植物的品质育种、储藏、加工特性等具有重要意义。而且可溶性糖广泛存在于植物的根、茎块和种子中,是人体热量的最最主要来源, 具有较高的营养价值。本文重点介绍蒽酮比色法、铜还原碘量法、费林试剂法、原子吸收法、气相色谱法、液相色谱- 蒸发光散射法,及连续流动法这几种实验如何定量测定可溶性糖含量。 1 蒽酮比色法 原理糖在硫酸作用下生成糠醛,糠醛再与蒽酮作用形成绿色络合物,颜色的深浅与糖含量有关。在 625 nm 波长下的 OD 值与糖含量成正比。由于蒽酮试剂与糖反应的呈色强度随时间变化,故必须在反应后立即在同一时间内比色。 仪器与材料 实验仪器分光光度计, 电炉, 铝锅,电子天平, 20ml 刻度试管, 刻度吸管 5ml 1支、 1ml 2支,漏斗。 实验试剂( 1)蒽酮乙酸乙酯试剂:取分析纯蒽酮 1g,溶于 50ml 乙酸乙酯中,贮于棕色瓶中, 在黑暗中可保存数星期,如有结晶析出,可微热溶解。(2)浓硫酸(比重 )。 实验材料植物叶片。 实验方法 标准曲线的制作取 20ml 刻度试管 11支,从 0~10分别编号,按表 24-1 加入溶液和水。表1 各试管加溶液和水的量管号01、23、45、67、89、 10 100 μ g/ml 蔗糖液(ml) 0 水(ml) 蔗糖量(μ g)0 20 40 60 80 100 然后按顺序向试管内加入 1ml 9% 苯酚溶液,摇匀, 再从管液正面快速加入 5ml 浓硫酸, 摇匀。比色液总体积为 8ml ,在恒温下放置 30min ,显色。然后以空白为参比,在 485n m 波长下比色测定,以糖含量为横坐标,光密为纵坐标,绘制标准曲线,求出标准直线方程。按表 1加入标准的蔗糖溶液,然后按顺序向试管中加入 蒽酮乙酸乙酯试剂和 5ml 浓硫酸,充分振荡,立即将试管放入沸水浴中,逐管均准确保温 1min ,取出后自然冷却至室温,以空白作参比,在630nm 波长下测其光密度,以光密度为纵坐标,以糖含量为横坐标,绘制标准曲线,并求出标准线性方程。 可溶性糖的提取取新鲜植物叶片,擦净表面污物,剪碎混匀,称取 ~ ,共3份,或干材料。分别放入 3支刻度试管中,加入 5~ 10ml 蒸馏水,塑料薄膜封口,于沸水中提取 30mi n (提取 2次),提取液过滤入 25ml 容量瓶中,反复冲洗试管及残渣,定容至刻度。 显色测定吸取样品提取液 于 20ml 刻度试管中(重复 2次) ,加蒸馏水 ,以下步骤与标准曲线测定相同,测定样品的光密度。 结果计算可溶性糖含量(mg/g) =(从回归方程求得糖量/吸取样品液的体积)×提取液量× 稀释倍数÷样品干重×10 -62 铜还原碘量法 原理试剂中的 Cu 2+ 与还原糖作