酵母细胞酶法催化合成谷胱甘肽的研究.pdf

、,这两种结构是谷胱甘肽许多重要生理功能的基础,;甘氨酸和半胱氨酸残基参与胆酸的代谢;分子中的巯基参与中和自由基解毒等重要生理功能,在食品工业和医药中具有重要的应用前景。本文主要研究内容如下: ,分别测定他们的细胞生物量和胞内谷胱甘肽(GSH)含量,∥L, wetcells;验证考察了4种不同提取方法对细胞内 GSH含量测定的影响,结果表明,温差破碎法提取效果较好。同时比较9株酵母菌催化合成GSH的能力,结果显示,絮凝酵母SP5 GSH合成酶系活力相对较高,,每克湿细胞催化前体AA合成GSH转化率为 %。 、硫酸镁浓度、磷酸钾缓冲液浓度、葡萄糖浓度、反应温度以及振荡反应速度对絮凝酵母SP5细胞催化前体AA合成GSH的影响;正交试验分析法研究不同反应液体积与菌体量比、硫酸镁浓度、磷酸钾缓冲液浓度以及葡萄糖浓度4个因素的交互作用。结果表明,合成GSH的适宜条件为:谷氨酸60mmol/L、半胱氨酸20mmol/L、甘氨酸 20mmol/L、七水合硫酸镁20mmol/L、、pH 100mmol/L,30℃下,200r/min,振荡反应时间6h。在此条件下,絮凝酵母SP5 ,%,%。 ,分析了培养温度、发酵培养基起始pH值、摇瓶装液量、接种量、发酵培养基碳源、有机氮源以及无机氮源7个因素对絮凝酵母SP5细胞生物量以及催化合成GSH的影响;正交试验分析发酵培养基碳源、有机氮源以及无机氮源这三个因素的交互作用,确定了较优的发酵条件如下:培养温度 30℃,,摇瓶装液量20%(250mL锥形瓶),接种量5%,培养基组成:蔗糖30∥L,蛋白胨259/L,硫酸铵59m,KH2P04 ,MgS04。7H20 摘要 ∥L,∥L,%,%。 ,提高其催化合成GSH的转化率,实验采用Triton X-100、Tween 80、SDS三种不同的表面活性剂,分别配制成浓度为 %、%、1%的溶液,考察细胞通透性对催化合成GSH的影响,实验结果表明1%浓度的Triton 。C处理2h时效果较好,对其浓度及时间做进一步优化后,%浓度的Triton 。C下处理2h效果较好,%,%。关键词:谷胱甘肽;酵母菌;酶催化;前体AA;表面活性剂 ABSTRSCT ABSTRACT Glutathione is a pound peptide bond simultaneously has 7-glutamyl and thiol two bioactive tripeptide condensation byL-glutamic acid, L-cysteine two structures isthestructuralbasisofmany important physiological functions instance ithas a 7-glutamine bonds involved in theamino acidtransporter,glycine and cysteine residues involved in bile inmolecules toparticipate infreeradical detoxificationand otherimportant physiological functions which hasimportant applications inthefood main contents ofthisthesis are asfollows.