茶叶咖啡因测定修改1.doc

反相高效液相色谱法测定茶叶中咖啡因的含量

1. 熟悉液相色谱仪的基本构造和操作方法
2. 学会利用外标法对物质进行色谱定量分析

液相色谱法是同一时刻进入色谱柱中的各组分,由于在流动相和固定相之间溶解、吸附、渗透或离子交换等作用的不同,随流动相在色谱柱中流过时,在两相间进行反复多次地分配过程,使得原来分配系数具有微小差别的各组分,产生了保留能力明显差异的效果,进而各组分在色谱柱中的移动速度就不同,经过一定长度的色谱柱后,彼此分离开来,最后按顺序流出色谱柱而进入检测器,在记录仪上或色谱数据机上显示出各组分的色谱行为和谱峰数值。通过测定各组分在色谱图上的保留时间,可直接进行组分的定性;测量各峰的峰面积,则可作为定量测定的参数。

仪器:
高效液相色谱仪(日本岛津10AVP型)、溶剂过滤器、样品溶液过滤器、微量进样器
试药:甲醇、乙腈、超纯水、咖啡因对照品
四、色谱条件
色谱柱:C18(250×,5um)
流动相:甲醇-乙腈-水=45:10:45 (v/v)
检测器及检测波长:紫外检测器 280nm
流速:
五、实验操作
1. 对照品溶液的配制:准确称取咖啡因对照品适量,用乙腈:水(1:1)混合溶剂配制成1mg/mL 咖啡因储备液;分别移取10μL、20μL、40μL、60μL、80μL咖啡因储备液,、、 mg/mL、8 .00mg/mL、 mg/mL的一系列对照品溶液,备用。
2. 样品溶液的配制:准确称取 茶叶, 加乙腈:水(1:1)混合溶剂8mL,超声提取10min,用超纯水定容至10mL 过滤后并稀释20倍,备用。
3. 调用或创建咖啡因测定方法并运行方法
4. 测定:待基线平稳后,分别吸取50μL对照品溶液和样品溶液进样。每份溶液重复进样三次。
六、数据处理及计算
以对照品溶液峰面积与对应含量绘制工作曲线,根据样品溶液峰面积在曲线上查出其进样时含量,并计算得到茶叶中咖啡因的含量。
七、思考题
?
2. 如果测定可乐中咖啡因,样品应该如何处理?
附: 岛津10AVP型高效液相色谱仪操作
一、开机
。
(脱气机→A泵→B泵→检测器→柱温箱→主控器)。
,在计算机上启动化学工作站ClassVP 并点击Instrument ,输入用户名和密码,点击确定。
二、实验参数的设置
在Method下,进行操作:
,设置所用溶剂瓶中溶剂量后,点击OK;单击高压泵图标,·min-1,梯度洗脱溶剂B(水)0%,×107 Pa。
,设置柱温箱温度为25℃。
,设置检测波长为280nm,,数据采集时间7min。
四、运行样品
。
On命令启动系统(或单击各图标的on图标启动系统)。
,关闭Purge阀。
,单击sin