肠三叶因子对小鼠炎症性肠病保护作用机制的研究.pdf

中国医科大学
博士学位论文
肠三叶因子对小鼠炎症性肠病保护作用机制的研究
姓名:滕旭
申请学位级别:博士
专业:儿科学
指导教师:孙梅
20090401
肠三叶因子对小鼠炎症性肠病保护作用机制的研究·中文论著摘要·及其细胞壁上的一些保守成分——病原相关分子模式產刖及胃肠道的慢性非特异性炎症,一般指克罗恩病拿庖哐Х⒉』票蝗衔J歉腥尽⒍舅丶耙┪锏茸魑J级蛩仄苹党ι粘附分子、炎症介质等活性分子起着重要作用,它们参与粘膜炎症的多种免疫反琍,对肠黏膜天然免疫反应调节发挥关键作用。颊呓募集炎性细胞,释放自由基,损伤黏膜,激发先天性免疫反应。泛的缺失和固有层内的炎症细胞浸润改变。关于±砘颇壳八洳煌耆宄吾炎症性肠病琁R焕嗖∫蛏形赐耆魅返睦珻和溃疡性结肠炎琔。状畏⒆骺杉谌魏文炅洌暌韵吕Q性结肠炎和克罗恩病患儿占炎症性肠病总数的%.%。近十几年的研究发现,谖夜姆⒉÷室仓鹉暝龈撸嘉./。因此,谖夜彩且恢较常见的消化系统疾病。某Φ姥字⒑宛つぷ橹鹕耸瞧渲饕L卣鳌Q字⑿猿Σ〉牟∫蚝头⒉』制不明确,目前研究认为怯苫虻囊赘行裕肪骋蛩丶し⒑统Φ烂庖呦低失调等多种因素交互作用引起的消化系统自身免疫性慢性炎症疾病。皮屏障,使肠组织暴露于大量抗原中,诱发遗传易感宿主的粘膜免疫反应。在肠道炎症和粘膜免疫损伤的发生发展中各种炎症细胞及细胞因子鏣.、应,并作为免疫调节的中心环节,在械淖饔梦T嚼丛蕉嗟难芯克っ鳌M过特异性阻断这些炎症细胞和活性分子的产生、调控以及作用,下调免疫应答的强度,从而控制炎症、持续缓解病情已被视为研究热点。.,是近年发现的一种免疫受体,能识别病原微生物肠粘膜上皮细胞及固有层细胞大量表达,激活下游的细胞因子信号转导,炎症性肠病牟±肀硐衷谟诔Φ勒衬っ永没蚶Q裥纬桑掀は赴
实验材料及方法一、动物模型及分组二、实验标本采集及处理凋亡失调对炎症性肠病淖橹鹕撕兔庖吖δ芪陕矣凶胖匾5挠跋臁有重要的胃肠道黏膜保护和修复作用。实验证明谖殖ι掀は赴耐暾裕动物中心提供。随机分为椋孔保证每组小鼠每个时间点取材时灌肠后第於贤反λ蓝铮羧∑⒓⑸渎樽恚λ溃匆韵路椒ù砗捅4姹瓯荆但一般认为姆⑸肷掀は赴苹岛偷蛲黾铀佟⒀仔韵赴蛲黾趼凶琶芮关系。细胞凋亡失调可以导致自身免疫性疾病的发生。越来越多的证据显示细胞肠三叶因子粲谌峨募易澹且恢中滦偷纳ひ蜃永喽嚯奈镏剩恢复肠粘膜的正常通透性方面起到重要作用。但现在很多证据把,特别是与免疫调节联系在一起。更有实验证实梢缘鹘诨邓佬孕〕岢ρ子资竽P的免疫反应。近年来的实验也证实诘鹘谙赴蛲龇矫嬉簿哂幸欢ㄗ饔茫意味着贗的治疗上可能具有更多的价值。但外源性给予基因重组否可以对P托∈笃鸬奖;ぷ饔其机制是否与免疫调节和细胞凋亡干预有关庑┪侍獾幕卮鹨参A俅灿τ肐治疗峁├砺垡谰荨健康周龄雌性/∈螅亓耍芍泄娇拼笱б窖笛以上8莨喑σ┪锛案骨蛔⑸湟┪锏牟煌獴疌小鼠分为椋椋喝趸交撬直肠灌注%乙醇溶液灌肠后第炱鸶骨蛔⑸%%%乙醇溶液灌肠后第炱鸶骨蛔⑸肠生理盐水/只,连续;不列入本研究。造模后每天观察动物一般状况、粪便情况及称量体重;在造模后的第旌偷天收集粪便测定大便隐血分数,进行疾病活动度指数婪帧M备
三、试验方法及检测指标四、统计学分析⒘羧【喔孛左右的结肠组织约直鹁%多聚甲醛溶液和%戊二醛溶液固定,分别行瓻染色病理组织学计分、免疫组化、原位末端标记法⒘魇较赴跫觳馄⒓俺ο的ち馨徒嵯赴牡蛲銮榭黾癋、表达。行分析,组间比较采用,检验法及制作统计图,崾居邢灾圆钜臁蛲黾觳夂屯干涞缇倒鄄臁⑷〗岢Σ”洳课蛔橹寐酥轿伤郑浦兀瞥勺橹冉饨岢ψ橹髓过氧化物酶钚裕⒘羧〗:笞V.℃冰箱,。⑷〗岢ψ橹.,,用于〖J笛椤⒘羧⌒∈笃⒓俺ο的ち馨徒崃馨拖赴糜诹魇较赴羌觳狻⒍鄄煨∈笠话阕刺⑻逯睾团疟闱榭觥⒉±硇翁а芯髯槎镉诟魇奔涞愦λ篮螅士8骨唬鄄斐苎丈ā⒂形匏住⒊血、扩张、透壁溃疡及粘连。饩倒鄄欤航岢ψ橹9婀潭ê。缇倒鄄欤航岢ψ橹潭ê螅9孀魍干涞缇倒鄄旖岢ψ橹⒔峁购肠绒毛的变化。⒆橹Х椒ḿ觳饨岢ψ橹疢的含量。⒚、.蛋白的表达。检测结肠上皮细胞凋亡。.。法测定肠组织和—瓸鞍妆泶铩计量资料结果以均值曜疾又±表示,
粘液便、肉眼血便等症状,化验便潜血卅。严重者抽搐、周身凉、甚至死一、小鼠的一般情况二、小鼠结肠病理学变化组织肉眼观察光镜下病理变化观察肠组织在电镜下变化细胞浸润。灌肠第炜杉衬こ溲!⒊鲅!⒚永茫衬げ恪⒄衬は虏阒性粒细胞及其它炎性细胞浸润。病变严重小鼠肠壁全层弥漫性充血、出血,非局腺体排列不齐或破坏,杯状细胞