淋巴瘤基因克隆性重排检测.ppt

淋巴瘤基因克隆性重排和IGHV体细胞超突变检测
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ppt课件
血液肿瘤
形态学 （Morphology）
聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)
毛细管凝胶电泳(CE)
荧光实时定量PCR(RTQT-PCR)
一代测序(Sanger)
二代测序(NGS)
分子生物学 （Molecular）
免疫组化（IHC）
流式细胞术（FCM）
免疫学 （Immunology）
荧光原位杂交（FISH）
细胞遗传学（Cytogenetics）
辅助诊断
预后分析
指导用药
MRD检测
血液肿瘤（常规肿瘤）检测方案-MICM综合分子检测(旌准方案)
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分子检测
检测基因
方法
IG/TCR
基因重排
IGH，IGK，IGL，TRB，TRD，TRG
GEL (PAGE)
ABI (CE)
NGS
IGHV超突变
IGH
GEL (PAGE)
ABI (CE)
NGS
基因突变
EZH2, DNMT3A, IDH2…
Sanger
NGS
Moffitt, A. B. and S. S. Dave (2017). J Clin Oncol 35(9): 955-962.
分子检测-淋巴瘤
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最丰富的阳性对照
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BIOMED-2唯一授权的商品化试剂
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全面涵盖各种T\B细胞重排类型
可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的“金标准”
超过400例的临床样本验证，反应体系稳定，结果可靠
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淋巴细胞克隆性基因重排检测产品特点
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B-Cell Receptors (BCR) /Immunoglobulins (Ig)
T-Cell Receptor (TCR)
蛋白
基因
染色体定位
Ig重链
IGH
14q32
Ig轻链
IGK
2p12
Ig轻链
IGL
22q11
蛋白
基因
染色体定位
TCRα
TRA
14q11
TCRβ
TRB
7q32
TCRγ
TRG
7p15
TCRδ
TRD

淋巴细胞克隆性基因重排检测的目标分子Ig和TCR--单一基因重排，即恶性淋巴细胞
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IGH, TRB & TRD: V, D, and J
IGK, IGL, and TRG: V and J regions
正常淋巴细胞成熟过程/良性病变
多克隆性
多种形式的基因重排
恶性淋巴瘤发生的过程
单克隆性
突出单一形式的基因重排
多样性与克隆性
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鉴别诊断：明确是淋巴组织反应性还是淋巴细胞恶性增殖
辅助诊断：少见类型淋巴瘤，如肝脾T细胞淋巴瘤
亚类分析：明确是B淋巴恶性增殖还是T细胞恶性增殖
区分同一患者两种淋巴细胞恶性肿瘤，包括复发与继发淋巴瘤
微小残留病灶监测，评估治疗效果或复发风险（NGS方法）
细胞免疫治疗监测，监测回输T细胞增殖状况和淋巴组织来源肿瘤细胞清除效果（NGS）
5%～15%的病例表现复杂，即使做了大量的免疫标志也可能难以鉴别其良恶性，需要进一步的手段区分。
利用分子生物学手段分析Ig和TCR基因的克隆性重排被WHO公认为该疾病诊断手段的重要补充。
淋巴细胞克隆性基因重排检测的临床意义
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基于PCR检测技术，简便、快速、成本较低，所需DNA量少，对DNA质量要求不高。灵敏度高于10%，需配制胶，安全清洁性较差。
基于PCR-毛细管电泳检测技术，敏感性高，检测周期较长，结果更加直观可靠
目前市场最被接受的检测方法。灵敏度无法满足MRD要求，难以定量和得到序列。
新兴技术，更高灵敏度（10-6），更高分辨率，更高的通量，更广泛的应用。但成本高，仪器贵，操作复杂，时间长。
（IGH, IGK,）（IGL）（TRB ,TRD,）（ TRG）BIOMED-2方案，唯一授权）
IGHV（依据ERIC指南）
IGH, IGK, TRB , TRG
IGHV
基于不同方法的产品系列-Invivoscribe公司
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Invivoscribe公司的IdentiCloneTM系列产品是基于PCR的克隆性检测产品，是BIOMED-2唯一授权的商品化试剂，获得CE认证，以其高度的灵敏性和特异性，成为可疑淋巴组织增生性疾病克隆性分析的“金标准”。
IdentiCloneTM系列产品具有精心优化的标准化试剂组成，具有最丰富的阳性对照，涵盖各种T\B细胞重排类型，经过了超过40