DotELISA检测犬恶丝虫抗体方法建立及犬恶丝虫可溶性蛋白抗原性研究.pdf

四川农业大学
硕士学位论文
Dot-ELISA检测犬恶丝虫抗体方法的建立及犬恶丝虫可溶性蛋白
的抗原性研究
姓名:刘德昊
申请学位级别:硕士
专业:预防兽医学
指导教师:杨光友;王成东
20070601
摘要犬恶丝虫病是由犬恶丝虫引起的呈世界性分布的寄生虫病,该病严重影响犬猫及小熊猫、狼、,容易确诊。而轻度感染、感染早期或夏季潜伏期病例却较难发现,,而往往比典型的临床症状出现得早,且血清学诊断方法比临床诊断方法有更高的检出率,因此本研究用提取的可溶性蛋白作为诊断抗原建立了检测犬恶丝虫病血清抗体的椒āU锒峡乖墙占娜袼砍婢锤炊橙凇⒀心ァ⒗胄牡姆法获得。通过反复筛选,确定了该法的最佳反应条件:,封闭条件为℃抗原抗体反应条件为备趸副昙堑腟猄钍使ぷ髋度为跤跫孜镒饔檬奔湮涤液均为..阻断试验和交叉试验表明诊断膜片具有良好的特异性:不与犬蠕形螨高免血清、犬钩口线虫高免血清、犬弓首蛔虫血清等阳性血清反应;膜片具有良好的灵敏性,高免血清作∈鸵嗄芗斐觯恢馗性试验表明该法重复性良好。诊断膜片保存期长,在4鲈缕浼觳饣钚圆变。该方法操作简便快捷,小时内即可完成。结果表明虮恪⒖焖佟灵敏、特异,重复性好,结果客观、稳定,肉眼容易判定,不需要特殊仪器,诊断膜便于寄送、保存,各种试剂和材料都可作到标准化。H袼砍娌〉恼锒和流行病学调查提供了良好的技术手段。为了寻找诊断犬恶丝虫病的特异性抗原,本研究应用对提取的犬恶丝虫可溶性抗原组分进行分析,然后用犬恶丝虫高免血清、自然感染犬恶丝虫血清和阴性血清进行免疫印迹5缬窘峁砻魈崛〉拇挚乖泄卜直娉蛋白条带,主要分子量范围在~C庖哂〖=峁砻鞲呙庋G逵胱匀桓腥狙G迥苁侗鹦矶嘞嗤奶醮但高免血清还能识别其它一些条带。另外,不同的自然感染血清识别的条带也有差异,最多的可识别条条带,最少的也能识别跆醮ǘ寄苁侗、、、、醯鞍状关键词:犬恶丝虫固迕庖哂〖G逑∈鸵汉拖洌鞔、、、、、、和
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铭缎秒辍卧论文独创性声明研究生签名:童隆㈥关于论文使用授权的声明研究生签名:列德、炙沙月日年耑‘日本人郑重声明:所呈交的学位论文是我个人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,学位论文中不包含其他个人或集体已经发表或撰写过的研究成果,也不包含为获得四川农业大学或其它教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。本人完全了解四川农业大学有关保留、使用学位论文的规定,即:学校有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意四荡笱Э梢杂貌煌绞皆诓煌教迳戏⒈怼⒋úパ位论文的全部或部分内容。导师签名/
文献综述犬恶丝虫抗原犬恶丝虫病是双瓣科、恶丝属娜袼砍甶殖迫乃砍寄生于犬的右心室及肺动脉等处的一种线虫病,该病引起食欲不振、循环障碍、贫血、慢性心内膜炎、右心室扩张、呼吸困难及痉挛性咳嗽等症状,严重时出现心力衰竭、便血、尿血、肝硬化和腹水““取8貌〕嗜蛐分布,在热带和亚热带地区流行程度较高,且流行时间比温带和寒带长,特别是在热带地区,该病几乎是全年流行,传播媒介为多种蚊咖。近几年在意大利“北美和澳大利亚的流行情况日趋严熏。在我国犬恶丝虫感染动物的现象极为普遍,候洪烈等嘲对辽宁丹东地区犬的感染情况调查显示,,北至沈阳,南到广州均有发生嘲,包括北京、上海、重庆、广东、福建、浙江、湖北、四川、云南、山东、辽宁、内蒙古等个省和直辖市㈨““”。除犬猫外,狼、小熊猫、狐、浣熊、麝鼠、海狸、白鼬S置、麝鼠、狐尾猴、猩猩、黑猩猩等多种野生动物和人阻“本勺髌渲漳┧拗鳌C庖吡Φ拖碌娜伺急桓腥荆谌谟壮可引起患者肺部及皮下出现结节,病人出现胸痛和咳嗽等症状。由于犬恶丝虫病的难根治性和广泛分布性,自~年代以来,学者们对其进行了大量的研究工作。到目前为止,国内的资料主要是关于犬恶丝虫的生物学特性、流行病学调查及药物治疗等方面的报道““⋯,很少有关于免疫学方面的报道嘲。随着免疫学和分子生物学技术的发展,国外近年来关于这方面的报道越来越多。犬恶丝虫抗原可分为体抗原、表皮抗原和捧泄分泌/珽抗原,由于体抗原组分复杂且特异性低,因此犬恶丝虫抗原的研究