兰州分光光度计.ppt

兰州分光光度计.ppt检验系简介
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2
谢国明
检验系 临床检验仪器学教研室
紫外--可见分光光度计
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内 容
1 光的吸收定律
2 紫外-可见分光光度计的基本结构和工作原理； 影响分光光度法准确性的因素；
紫外-可见分光光度计的类型。
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第一节、光的吸收定律
光吸收定律的表达式及其含义
朗伯(Lambert) 于1760年阐明了光的吸收程度和吸收层厚度的关系：
A ∝b
比耳(Beer)于1852年提出了光的吸收程度和吸收物浓度之间也具有类似的关系:
A ∝ c
二者的结合称为朗伯-比耳定律。
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第一节、光的吸收定律
I0：入射光强度; C:溶液浓度(单位mol·L-1);
b:液层厚度(通常以cm为单位)I:透射光强度;
T:透光度 A:吸光度
k:吸光系数(单位L·mol-1·cm-1).
b
I0
I
Date
6


0
A
C
100
50
0
T %
第一节、光的吸收定律
吸光度与透射率
C
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第一节、光的吸收定律
朗伯-比尔定律的适用条件：
；
。
但实际上难以获得真正意义上的纯单色光。分光光度计只能获得近乎单色的狭窄光普通带。复合光可导致对朗伯-比耳定律的正或负偏离。
假定只有在稀溶液(C < 10-2mol/L)时才基本符合。当溶液浓度C>10-2 mol/L 时，吸光质点间可能发生缔合等相互作用，直接影响了对光的吸收。
溶液中存在着离解、聚合、互变异构、配合物的形成等化学平衡时。使吸光质点的浓度发生变化，影响吸光度。


0
A
C
正偏离
负偏离
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第二节 紫外-可见分光光度计
分光光度计:能从含有各种波长的混合光中将每一单色光分离出来并测量其强度的仪器。
分析精密度高
测量范围广
分析速度快
样品用量少
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
射线
x射线
紫外光
红外光
微波
无线电波
10-2 nm 10 nm 102 nm 104 nm cm 10cm 103 cm 105 cm
可 见 光
第二节 紫外-可见分光光度计
根据使用的波长范围不同分为紫外光区、可见光区、红外光区以及万用（全波段）分光光度计等。
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10