高中生物蛋白质工程知识点.doc

高中生物蛋白质工程知识点.doc高中生物蛋白质工程知识点

　　基因工程是生物工程技术的一个重要分支,它和细胞工程、酶工程、蛋白质工程和微生物工程共同组成了生物工程。接下来我为你整理了，一起来看看吧。

　　：概念

　　蛋白质工程是指以蛋白质分子的结构规律及其生物功能的关系作为基础，通过基因修饰或基因合成，对现有蛋白质进行改造，或制造一种新的蛋白质，以满足人类的生产和生活的需求。

　　：基本工具

　　1.“分子手术刀”——限制性核酸内切酶限制酶

　　1来源：主要是从原核生物中分离纯化出来的。

　　2功能：能够识别双链DNA分子的某种特定的核苷酸序列，并且使每一条链中特定部位的两个核苷酸之间的磷酸二酯键断开，因此具有专一性。

　　3结果：经限制酶切割产生的DNA片段末端通常有两种形式：黏性末端和平末端。

　　2.“分子缝合针”——DNA连接酶

　　1两种DNA连接酶E•coliDNA连接酶和T4-DNA连接酶的比较：

　　①相同点：都缝合磷酸二酯键。

　　②区别：E•coliDNA连接酶来源于T4噬菌体，只能将双链DNA片段互补的黏性末端之间的磷酸二酯键连接起来;而T4DNA连接酶能缝合两种末端，但连接平末端的之间的效率较低。

　　2与DNA聚合酶作用的异同:¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬¬DNA聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的核苷酸片段的末端，形成磷酸二酯键。DNA连接酶是连接两个DNA片段的末端，形成磷酸二酯键。

　　3.“分子运输车”——载体

　　1载体具备的条件：①能在受体细胞中复制并稳定保存。

　　②具有一至多个限制酶切点，供外源DNA片段插入。

　　③具有标记基因，供重组DNA的鉴定和选择。

　　2最常用的载体是¬¬质粒,它是一种裸露的、结构简单的、独立于细菌染色体之外，并具有自我复制能力的双链环状DNA分子。

　　3其它载体： 噬菌体的衍生物、动植物病毒

　　：基本操作程序

　　第一步：目的基因的获取

　　： 编码蛋白质的结构基因 。

　　，真核基因是人工合成。人工合成目的基因的常用方法有反转录法_和化学合成法_。

　　

　　1原理：DNA双链复制

　　2过程：第一步：加热至90～95℃DNA解链;第二步：冷却到55～60℃，引物结合到互补DNA链;第三步：加热至70～75℃，热稳定DNA聚合酶从引物起始互补链的合成。

　　第二步：基因表达载体的构建

　　：使目的基因在受体细胞中稳定存在，并且可以遗传至下一代，使目的基因能够表达和发挥作用。

　　：目的基因+启动子+终止子+标记基因

　　1启动子：是一段有特殊结构的DNA片段，位于基因的首端，是RNA聚合酶识别和结合的部位，能驱动基因转录出mRNA，最终获得所需的蛋白质。

　　2终止子：也是一段有特殊结构的DNA片段 ，位于基因的尾端。

　　3标记基因的作用：是为了鉴定受体细胞中是否含有目的基因