CD137在SLE患者外周血淋巴细胞的表达.doc

CD137 在 SLE 患者外周血淋巴细胞的表达 CD137 在 SLE 患者外周血淋巴细胞的表达 2010-12-14 赵文璞曹英林张利宁李兴福孙汶生马春红 4-1BB 是由 Kwon 等〔 1 〕于 1989 年在小鼠 CD4 +、 CD8 +T 细胞中发现的一种膜表面分子, 它在 T 淋巴细胞活化过程中发挥着协同刺激作用〔1〕。 1996 年 Lotz 等〔2〕分离出经淋巴细胞活化诱导的膜分子称为 ILA(induced by lymphocyte activation) 并确认 ILA 是存在于人细胞表面的小鼠 4-1BB 的相似物。在 1996 年日本神户会议上将 ILA 及人 4-1BB(Hu4-1BB) 命名为 CD137 〔3 〕。由于 CD137 富含半胱氨酸, 所以成为肿瘤坏死因子受体超家族的新成员。 CD137 主要表达于经 PHA 、 PMA 、 CD3 单抗活化的 T 淋巴细胞表面,经 PMA 、抗细胞膜表面 Ig 抗体活化的 B 淋巴细胞表面,还表达于一些非淋巴细胞如经 IL-1 β活化的血管内皮细胞及肝癌细胞表面,但不表达于静止的细胞表面〔 4 〕。 SLE 患者体内存在着自身活化的淋巴细胞,故笔者有兴趣对 SLE 患者外周血淋巴细胞 CD137 的表达研究, 以深入探讨其在 SLE 发病机制中的作用。 1 资料与方法 研究对象 SLE 诊断符合 1982 年 ARA 的 SLE 分类修订标准。根据临床症状及实验室检查结果分为活动期和缓解期。活动期符合下列条件:①临床症状明显: 不规则发热、新出皮疹、口腔溃疡、浆膜炎、关节肿痛或神经系统病变。②补体 C3 降低、 IgG 升高、抗双链 DNA(ds-DNA) 抗体阳性。研究对象为 SLE 活动期患者 16 例,正常对照组 8 人。 材料 Ficoll 分离液( 购自中国医学科学院血液病研究所), PHA(Sigm a 公司), CD137 单抗(Famingen 公司), FACS(Becton Can) 方法 用 Ficol l 分离液常规分离正常人及 SLE 患者外周血单个核细胞。 淋巴细胞转化试验:将分离的单个核细胞用 RPMI 1640 培养液(含 10% FCS 、 100 IU/L 青霉素、 100 g/L 链霉素) 稀释成 1× 109/L , 取 100 μl 细胞悬液置 96 孔板中,每个样本设 4 个组: ①未加 PHA 对照组; ② PHA 刺激 24 小时组; ③ PHA 刺激 48 小时组; ④ PHA 刺激 72 小时组。在第①组中加入 50μl 培养液, ②③④组中加入 50μl PHA( 终浓度为 100 mg/L) 在 37℃、 5% CO2 中培养。 FACS 测定 CD137 的表达: 分别将培养板中的细胞吸出放入试管中,细胞总数为 5× 105 ,加 10μl1∶ 10 稀释的 CD137 单抗( g/L) ,室温 30 分钟, PBS 洗3 次,加 100 μl1∶ 50 稀释的 FITC- 羊抗鼠 Ig ,室温 30 分钟, PBS 洗3 次,上 FACS(Becton Can) 待测。 2 结果 SLE 患者与正常人外周血淋巴细胞表面 CD137 表达的