红细胞裂解液.doc

信念的力量在于即使身处逆境,亦能帮助你鼓起前进的船帆; 信念的魅力在于即使遇到险运, 亦能召唤你鼓起生活的勇气; 信念的伟大在于即使遭遇不幸, 亦能促使你保持崇高的心灵。配制试剂所需材料: 1. Ammonium Chloride x10 Lysing Concentrate Solution a) NH4Cl ( M) 80g b) KHCO3 (100 nM) 10g c) Na4EDTA (10 nM) g d) Distilled H2O 1000 mL 2. 1N HCl or 1N NaOH (调节 pH 值用) 配制步骤: Luo J, Miller MW (1997) Differential sensitivity of human neuroblastoma cell lines to ethanol: correlations with their proliferative responses to mitogenic growth factors and expression of growth factor receptors. Alcohol Clin Exp Res 21:1186 – 1194. 1. 将以上 a、b、c 试剂溶于 900ml 去离子水中; 2. 调节溶液 pH 值到 - ,加去离子水定容到 1000ml ; 3. 在制备工作液时,将此储存液稀释 10 倍后使用。保存: 储存液储存于 2-8 °C 不能超过半年(六个月); 2. 在使用前, 工作液每天都应该新鲜配制放置于室温, 当日用不完的弃掉。红细胞裂解液( Tris-NH4Cl ):称取 氯化铵、三羟甲基氨基甲烷( Tris ) 加水溶解并稀释至 500ml 。 μm 滤膜过滤除菌, 4℃保存。细胞悬液加红细胞裂解液后,混匀静止 4-5 分钟,待红细胞完全破碎, 1000r/min 离心 5 分钟, 弃上清去除红细胞, 得到白细胞沉淀。结果第一次用的时候, 觉得还可以, 第二次和第三次用的时候离心后发现有絮状物质,不能很好的沉淀出白细胞。(一) 1 试剂配制原液 1号: 10g 葡萄糖+ g 磷酸二氢钾+ g 磷酸氢二钠( 7H2O ) +20 ml5 g/L 酚红溶液,加双蒸水定容至 1 000 ml。原液 2 号: g 氯化钙( 2H2O ) + g 氯化钾+80 g 氯化钠+ g 氯化镁+ g 硫酸镁( 7H2O ),加双蒸水定容至 1 000 ml。应用液有 3 种, 1#: 10 ml 原液 1号+10 ml 原液 2 号,加双蒸水定容至 100 ml。 2#: 20 ml 原液 1号+20 ml 原液 2 号,加双蒸水定容至 100 ml。 3#:1 ml 原液 1号+1 ml 原液 2 号,加双蒸水定容至 100 ml。 2 红细胞裂解取 100 μl 抗凝全血,加 2 ml 应用液 3# ,混匀 15~ 20s ;加 2ml 应用液 2#, 混匀 15~ 20s;加4 ml 应用液 1#, 混匀 15~ 20s; 300 ×g 离心 2 min ,弃上清;收集沉淀,加 PBS 缓