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高效液相色谱_201Xppt课件第十三章
高效液相色谱法
HPLC
分析化学(下，第三版)
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精选课件
高效液相色谱法：以气相色谱为基础，在经典液相
色谱实验和技术基础上建立的一种液相色谱法
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主要内容
一、概述
二、基本理论及条件选择
三、各类高效液相色谱法
四、影响分离的因素
五、高效液相色谱仪
六、超效液相色谱技术简介
七、HPLC定量分析方法学考察
八、HPLC应用
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第一节 概述
一、HPLC与经典LC区别
二、HPLC与GC差别
三、高效液相色谱仪流程图
四、特点
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一、HPLC与经典LC区别
主要区别：固定相差别，输液设备和检测手段
1．经典LC：仅做为一种分离手段
柱内径1~3cm，固定相粒径>100μm 且不均匀
常压输送流动相
柱效低（H↑，n↓）
分析周期长
无法在线检测
2．HPLC：分离和分析
柱内径2~6mm，固定相粒径<10μm（球形，匀浆装柱）
高压输送流动相
柱效高（H↓，n↑）
分析时间大大缩短
可以在线检测
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二、HPLC与GC差别
相同：兼具分离和分析功能，均可以在线检测
主要差别：分析对象的差别和流动相的差别
1．分析对象
GC：能气化、热稳定性好、且沸点较低的样品，
高沸点、挥发性差、热稳定性差、离子型及
高聚物的样品不可检测
占有机物的20%
HPLC：溶解后能制成溶液的样品，
不受样品挥发性和热稳定性的限制
分子量大、难气化、热稳定性差及高分子
和离子型样品均可检测
用途广泛，占有机物的80%
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续前
2．流动相差别
GC：流动相为惰性气体
组分与流动相无亲合作用力，只与固定相作用
HPLC：流动相为液体
流动相与组分间有亲合作用力，为提高柱的选择性、
改善分离度增加了因素，对分离起很大作用
流动相种类较多，选择余地广
流动相极性和pH值的选择也对分离起到重要作用
选用不同比例的两种或两种以上液体作为流动相
可以增大分离选择性
3．操作条件差别
GC：加温操作
HPLC：室温；高压（液体粘度大，峰展宽小）
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三、高效液相色谱仪流程图
1．贮液罐（滤棒，可滤去颗粒状物质）
2．高压泵（输液泵）
3．进样装置
4．色谱柱——分离
5．检测器——分析
6．废液出口或组分收集器
7．记录装置
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续前
四、HPLC的特点和应用
“三高” “一快” “一广”
高柱效——n=104片/米，柱效高（远高于一般LC）
高灵敏度
高选择性
分析速度快
应用范围广泛（可分析80%有机化合物）
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第二节 基本理论和条件选择
一、塔板理论——平衡理论
二、速率理论 ——Vander方程
三、HPLC法中分离条件的选择
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