淀粉酶活性测定.doc

淀粉酶活性测定.doc《植物生理生化实验》
: .
《植物生理生化实验》
实验四
萌发种子淀粉酶活"生的测定
AYi
为什么要测定淀* 酶活性？ ？
《植物生理生化实验》
测定意义:
•淀粉酶普遍存在于植物体内，特别是萌发后的禾
谷类种子淀粉酶活性最强。
•淀粉酶活性高低可以衡量种子萌发速率。
•淀粉酶活性高低作为水稻抗逆性的生化指标（如 干旱、盐、重金属胁迫）
《植物生理生化实验》
一、目的要求:
1>
了解Q—淀粉酶、B—淀粉酶的不同点及其
《植物生理生化实验》
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淀粉酶活性测定的意义；
2、掌握恒温水浴的控温方法;
3、
学会用比色法测定淀粉酶活性的原理及其操
作要点;
4、比较不同溶液浸种处理的水稻萌发种子淀粉
酶活性的差异。
二、原理:
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0根据0L —和B —淀粉酶的理化性质
a-淀粉酶不耐酸，在pH3. 6以下迅速钝化;
P -淀粉酶不耐热，在70°C15min则被钝化。
丫 ■淀粉酶提取液
1、淀粉酶提％
.^11
70 °C 15分钟钝化B ■淀粉酶 I B ■淀粉酶提取液
pH36以下0°C钝化a ■淀粉酶
2、(C6H10O5)n +
^m^O,5nC12H22On
40C
3、C12H22On+3, 5—二硝基水杨酸f 3・氨基・5■硝基水杨酸
压粉酶活性与产生的还原糖量成正比
()2N
COOH
()][
+
COOII
()11
1厳
()?N
棕红色产物
入 max=540nm
3. 操作步骤:
!■）淀粉酶原液提取：
称取辽萌发种子一
置于研钵中
石英砂
2ml蒸馆水
〉研磨匀浆
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-用少量多次蒸馅水洗入100ml容量瓶，并用蒸饱水定容至
刻度一混匀室温放置lOmin （常摇动使其充分提取）一混匀
用干燥滤纸过滤至三角瓶中，
滤液即为淀粉酶原液。
2）淀粉酶稀释液：
吸取上述淀粉酶原液lml,加4ml蒸馅水，摇匀。
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取9支干净的具塞刻度试管，编号，按下表进行操作:
测定项目Q
a -淀粉酶活性测定卫
2+P）-淀瞒脚産」
参2 比心 管Q
对照管3
测定管Q
对照管期
测定管1
试管编号Q
水I卞
盐1-2
水 I -2P
盐1-2卩
水 II -W
盐 II -2
水II-2卫
盐II -肿
淀粉酸瘵鞭（ml） Q
ip
2
0卩
0P
钝化6 -淀粉酶/
置于讥准牺泯15皿
+1
淀粉酶稀释液（rnl）
0。
2
2
Of
1P
1P
2mlp
DNS试剂（ml） Q
2心
2"
2
2
2e
2心
2
熱
预•保温（4。C ）e
置于40*0预保温10»ia^
5S*
1%■淀粉溶液（ml）- （
1P
2
1卩
1p
2
1+5
水屮
臨反应时间口
馳均匀一
-首于40C准廡温（水解）53
DNS试剂（ml）相
0P
2
2。
2a
0心
0P
2心
2心
2Q
显色反应Q
取出以上各管一苴于沸水裕准确加热IOpuL取出冷却-用蒸瞥水定容到
20mlf揺匀-^以参比管调零点，于540nm比色。“
540nmOD 值门
□
P
-P
测定项目Q
/ a -眈 >
L 3+P)-淀備
参2 比心 管Q
对照管2
测定管门
对照管3
测定管1
试管编号Q
水I -却
盐1-2
水 I -2P
盐I-肿
水 II -W
盐 II -2
水II-2卫
盐II -肿
淀粉融鞭（ml） 43
ip
2
0心
0P
钝化6 -淀粉酶/
置于讥准牺泯15皿
+1
淀粉酶稀释液（rnl）
0P
2
2
1P
1P
2mlp
DNS试剂(m