犬瘟热病毒核蛋白基因的克隆、表达及其间接elisa方法的建立.pdf

独创性声明搴A声鞠掰呈交熬论文是我令久在潆疼掺等下滋孬载霹究工掾及取褥妁醭炎戏累。尽我所知,酴了文中特别加以标;雯和致谢翦地方井,论文中不包含其镌入醴经靛表或撰笃过鲍磷突袋鬃,也不毽含为获褥淀潮农韭大学或葵它教窘壤橡熬学位或疆书惩使用避的材料。与我~圊工作的阐志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了落意。疆究皇餐名:魏孓黎醚澎:≥鳓∥每g嚣转嚣导嬲签盘:2嘲翻l 融间:沏√年多月,8翻关于论文使用授权的说明本人竞念了解沈阳农她大学蠢关缲馨、使用学位论文豹规定,即;掌校宥权像留邀交论文的复印{牛和磁盘,允许论文被畿阅和借阐,可黻采用影印、缩印或扫描簿复制手段漂夺、落绦擘整论文。鞠意浼戮表篷大学可强爆不润方式在不掰媒露上没袭、健撵攀位论文的内容。辩黧;》筋舌年∥嚣霜蠢时闽;≯勋<年g月,》门蒙冲弛蕊泐名‰擞戤襁鞴沈阳农泣大学硕士学位论文犬痘热病毒核蛋白基因黔克隆、表达及其间接ELlsA方法的建立摘要犬瘟热蹙盘犬癜热病毒(c雠i拄eDisl篁|黼pervi糯s,C珏V)感染辑孳l起的一秘急性、高度接触性传染病。本研究幂b用PeR技术扩增出CDV LP株N基因,避行克隆,成功实现了N基因在大肠杆菌中的表达。对表达的重组蛋自避行初步纯忧,利用纯他的N基因重组蛋白初步建立了检测CDv抗体静间接ELISA方法。l。掇据Gen8anl(中擐遒酶eDV oI避姐s姊oon株基因序列,设计了一对特异性弓l物,霜该引物对分离的LP野簿橡的N 基因进行了醛PeR扩增,得剥1572bp黝Pe&片段,纯能后与克隆载体耜连,秘建 pGEM-N,爝于核替酸序列测定井进行遗传进化分析。 Onde斌。poo矗拣基因序歹}j,又设诗了一辩N基戮特异链攀l媲,将扩增德到承55妁p款咒R片段纯化詹与壳隆载体糨逶,构建砖∞,瘸予孩萤酸序歹fj测定。 双酶切,阏收强的片段克隆至《大麟杼菌表达载体蝼T_28《+)中,梅建羹缀质粒pEB28N, 将箕转纯大脑杼麓BL2l,蹋豫TG遴簿诱导表达。重缢菌菌钵裂解翻经sDs-孰蟾E电泳,可检测到相对分子量约25}∞的重组蛋自。免疫印迹证实该熏缀蛋囊可与CDV多宽隆抗体发生特癸性反应。3。剿豫表达的棱蛋彝鹣重缝融合蛋自作为抗骧,建立了检测 CDv抗体的阍接EL心A方法。结果表明;抗原的最逶包被浓度为lu蜘l,最适雹被条件为37℃l小时4℃过夜,待捻血清稀释度为l:400, 1:4000。建立的ELISA方法特辩性赢,重复牲好,敏感性强。美键渭:犬巍热病毒,核蚕臼,克隆,表达,闯接EⅨsA 英文摘要 Cloning, Expression andDeVelopment ofIndirectELISA of NueleoDrotein Ge藏e ofCDV Abs扭act Canine distempcr is a acute conta百oug disease娃"m caJline distemper the exp喇ment N 8eneof”s蜘n was柚pli韪ed强d expressed by 。The binant N prole浊was pu矗蠡ed and themeihod ofindirect EL王SA todetect位CDV antibody was togene sequellce ofc811inedistemper Vims sh面n OnderStepoort 犁脚d by(融Ba矗馥t痨ase,o辩辨至f ofsp积蠡e p五礅e嚣was&si簪蠢and黼醴韬珏黼plify N geme ofLp positiVe PCR product of 572bp was purified and ligatLlred witll pG赫M— eoH嚣lpos{鼍至ve鳓潮抽inanl was Hsed如r s鹎uenc嫩g鞠d Ng髓e w鹅虢s醴 i togene sequeIlce ofca|1inedistemper vin|s strain Onderstepoort reported by GenBank database,a110协er pair ofspeci蠢cprimers and usedto绷pl玲N positive PCR product of559bp wasp诚蠡ed andlig咖red w油 coIT℃ctpositiVe reconIbinallt wa8