酶工程实验报告六(纤维素酶的固定化及其性质测定).doc

touhun
本科学生实验报告仅供参考责任自负
学号 姓 名 孙 永 升
学院 生命科学学院 专业、班级 10生物技术
实验课程名称 酶 工 程 < 实 验 >
教师及职称 李 俊 俊 < 讲 师 >
开课学期 2012 至 2013 学年 第二学期
填报时间 2013 年 5 月 29 日
云南师范大学教务处编印
实验名称
实验方式
小组成员
实验六 纤维素酶的固定化及其性质测定
小组合作
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实验目的
；
学会固定化酶酶学特性的测定方法。
实验仪器、试剂和溶液：
仪器：
紫外分光光度计、比色皿（3个）、恒温水浴锅、试管架（1个）、l移液管、洗耳球、、注射器、标签（若干）等。
2 .2 试剂和溶液
2 . 柠檬酸钙缓冲液，，;
2 . 10mg/ml的CMC-Na溶液（底物溶液）;
2 . DNS试剂（CMCA-DNS）;
2 . 稀释到200倍的纤维素酶液;
2 . %、%、%、 %的海藻酸钙溶液;
2 . 2%的CaCl2溶液。
3、实验原理或装置示意图：
酶的固定化
把游离的水溶性酶限制在某一局部空间或固体载体上，酶固定后既不会流失，也不会污染产品，而且稳定性得到提高可长期反复使用。
最常用的固定化方法是包埋法。
海藻酸钙包埋法：通常是在其钙盐溶液中加入二价离子（如Ca2+），通过Ca2+取代Na+来形成凝胶网络。
4、实验方法步骤、操作流程及注意事项：
4 .1 实验方法：
（一）酶液的准备
（二）纤维素酶的固定化
（三）固定化纤维素酶性质的测定
4 .2 实验操作步骤：
1、将预先准备好的200倍纤维素酶液酶准确稀释：固定化酶稀释到1000倍，测游离酶稀释到10000倍待用。
2、纤维素酶的固定化：各取四瓶200mlCaCl2溶液于500ml三角瓶中待用。各取30ml不同浓度（%、%、%、%）的海藻酸钙于50ml小烧杯中，并分别取取稀释到1000倍的纤维素酶液10ml加入不同浓度的海藻酸钙溶液中，混合均匀。
3、用注射器将上述混合液取20ml（各取四次）逐渐滴入200mlCaCl2溶液的三角瓶中
静止冷却20min后,经固定化的小球纱布过滤晾干待用。
4、，，60℃预热10min。
5、准确计时后，于保温后的酶液中依次加如CMC-，在50℃水浴中继续保温30min（准确计时）。
（固定化酶对照中不加入底物、游离酶对照中先不加入酶液）
6、反应混合物物保温 30min后