冠状病毒实验室检测工作.ppt

冠状病毒实验室检测工作
冠状病毒（coronavirus)
概述：
1933年，Baudette等描述了鸡的“哮喘病”，1937年首次从小鸡体内分离出冠状病毒，分离的病毒被鉴定为传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis,IBV);
1951 Gledhill等分离出鼠肝炎病毒(Murine hepatitis virus,MHV)；
1965Tyrrell和 Bynoe首次在体外用人胎鼻和气管培养方法，从普通感冒病人鼻洗液中分离出一株病毒，命名为B814病毒。
冠状病毒实验室检测工作
1966年， Hamre 和Procknow用人胚肾细胞分离到类似病毒，代表株命名为229E病毒。
1967年，Mclntosh等用人胚气管培养从感冒病人中分离到一批病毒，其代表株是OC43（OC代表 organ culture）。随后证明，OC和229E病毒。
1968年， June Almeida和Tyrrell对这些病毒进行了形态学研究，电子显微镜观察发现这些病毒的包膜上有形状类似日冕的棘突，故提出命名这类病毒为冠状病毒。
1975年，国际病毒命名委员会（International Committee on the Taxonomy of Viruses,ICTV）正式命名了冠状病毒科（coronaviride)
致病性：人冠状病毒常引起 1)普通感冒、是轻型感染。 2)腹泻或胃肠炎。3）下呼吸道感染或肺炎
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X1
X2
X3
X4
X5
N
M
E
20,001
30,000










25,000
S
RNA 6
1
2
3
kB
RNA 5
RNA 4
RNA 3
RNA 2
kb
kb
kb
kb
kb
S
ORF 1b
ORF 1a
N
M
E
A
B
C
1
5,000
10,000
15,000
20,000
25,000
30,000
HCoV 基因组与mRNA
HCoVs为最大单股正链RNA病毒，独特的胞浆内非连续性转录模式，易于发生基因组的变异与重组
SARS-CoV
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中国大陆 全中国 全世界
发病 5327 发病 7429 发病 8096
死亡 349 死亡 685 死亡 774
涉及世界29个国家和地区
2002年冬－2003年春始发于我国广东，而后蔓延至我国大部分省市，并波及世界29个国家和地区。2003年4月16日，世界卫生组织宣布，严重急性呼吸综合症是由一种从未引起人类疾病的新型冠状病毒所致，这种新的病毒被命名为SARS-Coronavirus (SARS-CoV)
SARS (severe acute respiratory syndrome)
严重急性呼吸综合征－21世纪新出现的传染病
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在SARS-CoV发现后，又有三种新的引起呼吸系统疾病的HCoV（HCoV-NL63，HCoV-HKU1与HCoV-2012）被相继发现，引起人类呼吸道疾病的HCoV （包括SARS-CoV）已有6种，急需研发这类疾病诊断和鉴别诊断的新技术。
继SARS-CoV后,新HCoV病原的发现
HCoV-2012
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冠状病毒 NL63 van der Hoek et al., 2004. Nat. Med. 10:368-373
最初从一名七月龄的，因发烧、细支气管炎和结膜炎入院的患儿中分离。
在Hela和TMK细胞中检测到细胞毒效应CPE。
随机扩增，分离出特异性片段，经测序证明是一种新的呼吸道病毒。
NL63的特异性RT-PCR检测儿童的 NPA为阳性。
回顾性的分析从2002年12月到2003年2月中测序的呼吸道样本中，有7例阳性标本。
其中五个患儿是4-6月龄，两个患者,分别是40岁和67岁。
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冠状病毒 HKU1 Woo et al., 2005. J. Virol. 79:884-895
从一名71岁的患有肺炎的老人中分离出来。
该患者吸烟，并患有慢性阻塞性肺病。
临床症状：发烧，咳嗽，脓性痰，胸肺X光片显示有斑点浸润。
常规病毒学检测呈阴性。
RT-PCR 确定是一种新的冠状病毒。
回顾性筛选400份NPA样本，有一例是阳性，患者是一名35岁的妇女，患有肺炎。
定量