脯氨酸测定.ppt

实验七 干旱和盐度对植物体内游离脯氨酸积累的影响
植物生物学实验-植物生理部分
1
【实验目的和意义】
生长在干旱和盐度环境中的植物，体内常积累游离的氨基酸，而游离氨基酸积累的量又往往与环境干旱的程度、盐度和植物对干旱和盐度的抵抗力（即抗逆性）有关。因而，测定植物体内游离脯氨酸的含量，在一定程度上可从生理上了解植物受环境水分和盐度胁迫的情况，了解植物对水分和盐分胁迫的耐受性和抵抗能力，在生产上和育种学上有一定的意义。
2
【实验原理】
磺基水杨酸对脯氨酸有特定反应，当用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸便游离于磺基水杨酸溶液中。然后用酸性茚三酮加热处理后，茚三酮与脯氨酸反应，生成稳定的红色化合物，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下测定吸光度，即可从标准曲线上查出脯氨酸的含量。
3
【实验材料】
充足供水的小麦幼苗
干旱处理7天的小麦幼苗
经100mmol/L NaCl处理5天的小麦幼苗
经200mmol/L NaCl处理5天的小麦幼苗
4
【实验器材和试剂】
分光光度计；电子分析天平；离心机；小烧杯；普通试管；移液管；注射器；恒温水浴锅；漏斗；漏斗架；滤纸；剪刀；洗耳球。
﹪酸性茚三酮溶液配制： 6mol/L磷酸中，搅拌加热（70℃）溶解，贮于冰箱中。
3％磺基水杨酸配配制：3g磺基水杨酸加蒸馏水溶解后定容至100mL。
10μg/mL脯氨酸标准母液配制：精确称取20mg脯氨酸，倒入小烧杯内，用少量蒸馏水溶解，再倒入200ml容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度（为100μg/mL脯氨酸母液），再吸取该溶液10ml, 加蒸馏水稀释定容至100mL, 即为10μg/mL脯氨酸标准液。
冰醋酸。
甲苯。
5
【实验步骤】
脯氨酸标准曲线的制作
取6支试管，编号，按下表配制每管含量为0～20μg的脯氨酸标准液。
混匀后，置于沸水浴上加热30min，冷却。
各试管加入5mL甲苯，振荡30秒钟，静置片刻，使色素全部转至甲苯溶液。
以甲苯溶液为空白对照，在520mm波长处测定吸光度（A）值。以脯氨酸含量为横坐标，吸光度值为纵坐标，绘制标准曲线。
试 剂
管 号
0
1
2
3
4
5
6
10μg/mL脯氨酸标准液(mL)
0






蒸馏水（mL）
2





0
冰醋酸（mL）
2
2
2
2
2
2
2
﹪酸性茚三酮（mL）
2